[發(fā)明專利]一種快速高通量抗病毒藥物篩選模型

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010296978.9
• 申請(qǐng)日: 2010-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101983724A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖兵南
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 肖兵南
• 主分類號(hào): A61K49/00
• 分類號(hào): A61K49/00;C12Q1/02;A61P31/12
• 代理公司: 長(zhǎng)沙正奇專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 43113
• 代理人: 盧宏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物篩選模型領(lǐng)域，具體涉及一種抗病毒藥物的快速高通量篩選模型的建立方法，可應(yīng)用于藥物的篩選。

背景技術(shù)

藥物篩選模型(drug?screening?model，drugscreening?assay?method)是用于證明某種物質(zhì)具有藥理活性(生物活性、治療作用)的實(shí)驗(yàn)方法，這些實(shí)驗(yàn)方法是尋找和發(fā)現(xiàn)藥物的重要條件之一。人們?cè)陂L(zhǎng)期尋找藥物的實(shí)踐過(guò)程中，建立了大量用于新藥篩選的各類模型，大致分為經(jīng)典的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法、分子生物學(xué)篩選法、高通量藥物篩選法和高內(nèi)涵藥物篩選技術(shù)。

所謂動(dòng)物篩選法就是以動(dòng)物作藥物篩選的觀察對(duì)象，以動(dòng)物對(duì)藥物的反應(yīng)，證明某些物質(zhì)的藥理作用，評(píng)價(jià)其藥用價(jià)值。單純從新藥篩選的角度看，動(dòng)物篩選模型的最大優(yōu)點(diǎn)是可以從動(dòng)物身上直觀地反應(yīng)出藥物的治療效果、不良反應(yīng)以及毒副作用。由動(dòng)物模型獲得的篩選結(jié)果，對(duì)預(yù)測(cè)被篩選樣品的臨床效果、毒副作用和應(yīng)用前景具有十分重要的價(jià)值。但動(dòng)物篩選法也存在缺點(diǎn)：采用動(dòng)物模型進(jìn)行藥物篩選時(shí)，由于動(dòng)物的特殊性，決定了藥物篩選過(guò)程主要依賴于手工操作，而且只能對(duì)有限的樣品進(jìn)行篩選，使整體動(dòng)物模型篩選新藥具有明顯的局限性，效率低、成本高、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)需要時(shí)間長(zhǎng)、勞動(dòng)強(qiáng)度大、操作技術(shù)要求高、受試樣品需要量大(約5g)。

分子生物學(xué)篩選方法：近20年來(lái)，許多藥物作用的受體已被分離、純化，一些基因的功能及相關(guān)調(diào)控物質(zhì)被相繼闡明，為藥物篩選提供了許多新的靶點(diǎn)，這就使得藥物篩選模型從傳統(tǒng)的整體動(dòng)物、器官和組織水平發(fā)展到細(xì)胞和分子水平。分子生物學(xué)為藥物篩選提供了新型靶蛋白，對(duì)人工合成的組合化學(xué)庫(kù)和小分子肽庫(kù)進(jìn)行目的性藥物篩選。通過(guò)比較健康人群與患者間在機(jī)體組織細(xì)胞分子上的差異以及闡明模型組織中相應(yīng)蛋白質(zhì)的功能，從而正確地選擇、描述并確認(rèn)某些靶蛋白，這有助于更加理性和有目的性地進(jìn)行藥物篩選。生化水平的藥物篩選擬用開(kāi)發(fā)藥物作用的靶點(diǎn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，一般而言這種作用靶點(diǎn)是具有某種特定生理功能的蛋白質(zhì)，如酶和受體等，此外一些編碼功能明確的DNA也越來(lái)越多地成為藥物作用的新靶點(diǎn)。候選化合物與靶點(diǎn)混合后，可以通過(guò)酶聯(lián)免疫、熒光顯色、核磁共振等方法定量測(cè)定化合物與靶點(diǎn)的相互作用，從而成為篩選化合物的依據(jù)。生化水平的藥物篩選操作相對(duì)簡(jiǎn)單，成本較低，但是由于藥物在體內(nèi)的作用并不僅僅取決于其與靶酶的作用程度，吸收、分布、代謝、排泄均會(huì)對(duì)藥物的作用產(chǎn)生極大的影響，僅僅一道薄薄的細(xì)胞膜就能夠阻擋住許多候選化合物，因而生化水平的藥物篩選不確定因素更多，誤篩率較高。此外，該篩選方法手段單一、費(fèi)時(shí)耗財(cái)也成為其無(wú)法深入發(fā)展的缺陷。

高通量藥物篩選(high?throughput?screening，HTS)是20世紀(jì)80年代后期形成的尋找新藥的高新技術(shù)。采用的篩選方法一般是以藥物作用靶點(diǎn)為主要對(duì)象的細(xì)胞和分子水平的篩選模型，根據(jù)樣品與靶點(diǎn)結(jié)合的表現(xiàn)，判斷化合物的生物活性。由于這些篩選方法在微量條件下進(jìn)行，同時(shí)采用自動(dòng)化操作系統(tǒng)，可以進(jìn)行大規(guī)模的篩選，因而稱為高通量藥物篩選。高通量篩選依賴數(shù)量龐大的樣品庫(kù)，實(shí)現(xiàn)了藥物篩選的規(guī)?；?，較大限度地利用了藥用物質(zhì)資源，提高了藥物發(fā)現(xiàn)的概率，同時(shí)提高了發(fā)現(xiàn)新藥的質(zhì)量，充分利用了藥用資源。高通量篩選采用的是細(xì)胞、分子水平的篩選模型，篩選實(shí)驗(yàn)是在微量篩選系統(tǒng)中完成的，樣品用量一般在微克級(jí)(g)，節(jié)省了樣品資源，奠定了“一藥多篩”的物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)節(jié)省了實(shí)驗(yàn)材料，降低了單藥篩選成本。而且高通量藥物篩選為高度自動(dòng)化操作，不但減少了操作誤差的發(fā)生，降低了勞動(dòng)強(qiáng)度，而且提高了藥物篩選的效率和結(jié)果的準(zhǔn)確性。但是，高通量篩選所采用的主要是分子、細(xì)胞水平的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停魏文Ｐ投疾豢赡艹浞址从乘幬锏娜嫠幚碜饔茫挥糜诟咄亢Y選的模型總是有限的，要建立反映機(jī)體全部生理機(jī)能或藥物對(duì)整個(gè)機(jī)體作用的理想模型，也是不現(xiàn)實(shí)的。