[發(fā)明專利]一種熊果酸衍生物3-O-酮-12-烯-28-熊果酸的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010296460.5
• 申請日: 2010-09-26
• 公開（公告）號: CN101948502A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高寧;劉毅敏;張定林;劉鄂湖
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 孫立冰

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及天然藥物領(lǐng)域，具體涉及天然化合物熊果酸的化學修飾方法，更具體地，涉及熊果酸衍生物3-O-酮-12-烯-28-熊果酸的合成、分離方法，即利用合成、分離手段制備出3-O-酮-12-烯-28-熊果酸的方法。

背景技術(shù)

熊果酸(ursolic?acid，UA)又名烏蘇酸，屬五環(huán)三萜類化合物。熊果酸在藥用植物中分布廣泛，具有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗?jié)儭⒔档脱堑榷喾N生物活性。現(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)，熊果酸具有明顯的抗腫瘤作用，包括抑制腫瘤細胞生長、誘導腫瘤細胞分化、抗腫瘤組織血管形成及誘導腫瘤細胞凋亡等。這些結(jié)果表明，熊果酸是一種很有前途并有待廣泛開發(fā)利用的抗腫瘤藥物。隨著熊果酸抗腫瘤作用機制研究工作的深入進行，熊果酸很有希望成為新的抗腫瘤藥物用于臨床。然而，熊果酸是一種脂溶性化合物，其在動物體內(nèi)的生物利用度較低。因此，需通過化學修飾的方法將熊果酸的化學結(jié)構(gòu)進行修飾，以進一步提高熊果酸的抗腫瘤活性和生物利用度。

文獻報道對熊果酸的3-位羥基進行氧代，制得3-O-酮-12-烯-28-熊果酸，結(jié)構(gòu)式如下：

3-O-酮-12-烯-28-熊果酸

其抗腫瘤活性明顯優(yōu)于母體熊果酸。然而，在3-O-酮-12-烯-28-熊果酸的制備過程中，需要采用氯鉻酸鎓鹽(PCC)做為氧化劑，氯鉻酸鎓鹽反應(yīng)后形成粘狀物，使產(chǎn)品與催化劑分離非常困難，導致收率較低，總收率只有80％左右[Gnoatto，S.C.B.，Klimpt，A.D.，Nascimento，S.D.，Galera，P.，Boumediene，K.，Gosmann，G.，Sonnet，P.，Moslemi，S.European?Journal?of?Medicinal?Chemistry，2008，43：1865-1877.]。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明對熊果酸3-位羥基氧代的制備方法進行改進，提供一種分離方法簡單、容易操作、高純度、高收率的3-O-酮-12-烯-28-熊果酸制備方法。

發(fā)明人研究了反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間等對熊果酸3-位羥基氧代制備3-O-酮-12-烯-28-熊果酸的影響，重點對反應(yīng)完后產(chǎn)物和催化劑的分離方法進行了較大改進。在文獻報道的分離方法中，用PCC做氧化劑，反應(yīng)完后直接進行過濾，我們發(fā)現(xiàn)由于在反應(yīng)過程中氧化劑PCC生成了粘狀物，故非常難過濾，操作困難，而且PCC在二氯甲烷中溶解性較好，很難除去。本發(fā)明采用反應(yīng)完后直接濃縮干，再選用適當?shù)挠袡C溶劑進行提取的方法，使產(chǎn)物與催化劑PCC分離方法更簡單，操作更容易。得到的粗品再過硅膠柱，優(yōu)選300-400目硅膠進行柱色譜分離。更優(yōu)選采用干法過快速柱，操作方法更簡單、快速。

試驗發(fā)現(xiàn)，用不同的有機溶劑對濃縮后的反應(yīng)液進行提取，產(chǎn)品收率也是不同的。見表1。

表1采用不同溶劑提取的收率

由表1可見，采用四氫呋喃、乙醇、丙醇、異丙醇的提取效果則相對較差，而采用乙醚和丁醇的提取效果較好，產(chǎn)品收率高，因此，本發(fā)明優(yōu)選用乙醚或丁醇提取反應(yīng)液的濃度物。有機相減壓濃縮的溫度優(yōu)選為30-55℃。

本發(fā)明將提取液濃縮后得到的粗品采用干法上樣過快速硅膠柱處理，才洗脫過程中，試驗發(fā)現(xiàn)，不同的洗脫劑對產(chǎn)品的收率影響不同，較好的是乙酸乙酯和石油醚的混合溶劑作為洗脫劑。而乙酸乙酯和石油醚之間不同的比例也會直接影響產(chǎn)品收率，見表2。

表2洗脫劑的不同比例對產(chǎn)物的收率影響

從表中數(shù)據(jù)可以看出，當采用乙醚做提取溶劑的時候，過快速柱的時候用乙酸乙酯∶石油醚為3∶1做洗脫劑效果最好，可以獲得最高收率。

本發(fā)明制備3-O-酮-12-烯-28-熊果酸的方法操作簡單、分離快速，收率大于90％，最高可達95％以上。產(chǎn)品純度高，含量大于99％。適合大量生產(chǎn)，具有較大的應(yīng)用研究前景。

具體實施方式

實施例1

①將1.11g熊果酸用10ml干燥的二氯甲烷溶解，冰浴冷卻，然后加入0.6g氯鉻酸吡啶鎓鹽，攪拌反應(yīng)4小時，去掉冰浴，再在室溫條件下反應(yīng)8小時。

②將上述反應(yīng)完的反應(yīng)液減壓濃縮干，然后用丁醇提取產(chǎn)物3次，每次10ml，過濾，合并有機相，30℃減壓濃縮，得3-O-酮-12-烯-28-熊果酸粗品1.12g。