[發明專利]一種乳酸菌細胞壁肽聚糖微膠囊的制備方法

無效

• 申請號: 201010296426.8
• 申請日: 2010-09-29
• 公開（公告）號: CN101947213A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 孫慶申;韓德權;朱麗
• 申請（專利權）人: 黑龍江大學
• 主分類號: A61K9/50
• 分類號: A61K9/50;A61K35/74;A61K38/16;C12N1/20;A61P37/04;C12R1/225
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 金永煥

1.一種乳酸菌細胞壁肽聚糖微膠囊的制備方法，其特征在于乳酸菌細胞壁肽聚糖微膠囊的制備方法按以下步驟實現：一、將L-乳酸菌接種到MRS培養基中，在37℃下富集培養48h，得菌種培養液，經離心、洗滌后收集L-乳酸菌菌體；二、取20g?L-乳酸菌菌體懸浮于100mL濃度為100g/L的三氯乙酸溶液中，在75℃水浴中處理25min，冷卻至室溫后離心并收集沉淀，然后用蒸餾水洗滌沉淀至pH值呈中性；三、按固液比1∶5將沉淀加入到胰蛋白酶磷酸緩沖液中，在37℃、轉速120r/min的條件下震蕩12h，以1500r/min的轉速離心5min棄取沉淀，然后取上清液以8000r/min的轉速離心15min，得去蛋白的細胞壁沉淀，用蒸餾水洗滌3次后加入氯仿甲醇混合溶液浸泡去蛋白的細胞壁沉淀6h，再以8000r/min的轉速離心15min，所得沉淀用無水乙醇洗滌脫水，自然干燥后放入研缽中研磨成粉末，得肽聚糖提取物粉末；四、將50mg肽聚糖提取物粉末和5ml蒸餾水混合后超聲處理10min，得懸濁液；五、將50mg殼聚糖和5ml質量濃度為2％的醋酸溶液混合，然后加入懸濁液，攪拌后靜止消泡，再滴加到60ml液體石蠟中并磁力攪拌，乳化1h后加入0.15ml質量濃度為50％的戊二醛溶液，交聯3h，得反應液；六、反應液以4000r/min的轉速離心10min，棄去上清得黃色沉淀，然后依次用石油醚清洗3次、異丙醇清洗2次、蒸餾水清洗1次，即完成乳酸菌細胞壁肽聚糖微膠囊的制備。

2.根據權利要求1所述的一種乳酸菌細胞壁肽聚糖微膠囊的制備方法，其特征在于步驟一中MRS培養基由10g的牛肉蛋白粉、10g的魚肉汁、5g的酵母浸出粉、20g的葡萄糖、5g的醋酸鈉、2g的檸檬酸二銨、0.1g的吐溫80、0.58g的硫酸鎂和0.28g的硫酸錳加入蒸餾水并定容至1000mL組成，121℃滅菌15min，調節pH值為6.2～6.4。

3.根據權利要求1或2所述的一種乳酸菌細胞壁肽聚糖微膠囊的制備方法，其特征在于步驟一中離心采用4000r/min的轉速離心15min。

4.根據權利要求3所述的一種乳酸菌細胞壁肽聚糖微膠囊的制備方法，其特征在于步驟一中洗滌采用pH值為6.8的PBS緩沖液洗滌菌體至菌體呈白色。

5.根據權利要求4所述的一種乳酸菌細胞壁肽聚糖微膠囊的制備方法，其特征在于步驟二中離心采用8000r/min的轉速離心10min。

6.根據權利要求5所述的一種乳酸菌細胞壁肽聚糖微膠囊的制備方法，其特征在于步驟三中氯仿甲醇混合溶液由氯仿和甲醇按1∶2的體積比混合而成。

7.根據權利要求6所述的一種乳酸菌細胞壁肽聚糖微膠囊的制備方法，其特征在于步驟三中胰蛋白酶磷酸緩沖液由和0.9ml濃度為3mg/ml的胰蛋白酶和0.1ml的PBS緩沖液組成，pH值為8.0。

8.根據權利要求7所述的一種乳酸菌細胞壁肽聚糖微膠囊的制備方法，其特征在于步驟四中超聲處理的功率為800W。

9.根據權利要求8所述的一種乳酸菌細胞壁肽聚糖微膠囊的制備方法，其特征在于步驟五60ml液體石蠟中含有2.4g司班80。