[發(fā)明專利]玉米花色素苷調(diào)節(jié)基因Lc應(yīng)用于快速培育高黃酮含量紅米水稻及方法和表達(dá)載體

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010296308.7
• 申請(qǐng)日: 2010-09-29
• 公開（公告）號(hào): CN101948848A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李建粵;許昱;沈忠偉;白潔;張?zhí)鞈c;董彥君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/29
• 分類號(hào): C12N15/29;C12N15/63;A01H4/00;A01H5/00;C12Q1/68
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾諭

1.玉米花色素苷調(diào)節(jié)基因Lc在快速培育高黃酮含量紅米水稻方面的應(yīng)用。

2.一種快速培育高黃酮含量紅米水稻的表達(dá)載體，其特征在于，在質(zhì)粒載體的序列中依次包含以下序列：

A:?啟動(dòng)子，選自水稻中貯藏蛋白質(zhì)基因的啟動(dòng)子；?

B:?5’UTR序列，為啟動(dòng)子所屬同一基因單元的5’UTR序列；

C:?玉米花色素苷調(diào)節(jié)基因Lc；

D:?終止子。

3.權(quán)利要求2所述一種快速培育高黃酮含量紅米水稻的表達(dá)載體，其特征在于，在啟動(dòng)子下游的5’UTR與目的基因Lc?序列之間，包括啟動(dòng)子所屬同一基因單元編碼信號(hào)肽片段的核苷酸序列。

4.權(quán)利要求2或3所述一種快速培育高黃酮含量紅米水稻的表達(dá)載體，其特征在于，還包括潮霉素抗性基因和gus報(bào)告基因。

5.一種快速培育高黃酮含量紅米水稻的方法，其特征在于，步驟包括：

（1）?將含有玉米花色素苷調(diào)節(jié)基因Lc的表達(dá)載體導(dǎo)入白米水稻受體組織：將含有玉米花色素苷調(diào)節(jié)基因Lc的表達(dá)載體的根癌農(nóng)桿菌與白米水稻受體組織共培養(yǎng)；或利用基因槍法用含有玉米花色素苷調(diào)節(jié)基因Lc的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化白米水稻受體組織；

所述表達(dá)載體中依次包含啟動(dòng)子、5’UTR序列、玉米花色素苷調(diào)節(jié)基因Lc和終止子，還包括潮霉素抗性基因和gus報(bào)告基因；

所述啟動(dòng)子選自水稻中貯藏蛋白質(zhì)基因的啟動(dòng)子，所述5’UTR序列為啟動(dòng)子所屬同一基因單元的5’UTR序列；

（2）?用潮霉素篩選轉(zhuǎn)化后的水稻受體組織，進(jìn)行再生和種植，篩選獲得含有Lc基因的T₀代植株；

從含有Lc基因的T₀代植株收獲T₁代種子，篩選呈紅米的后代；

（3）?對(duì)T₁代紅米進(jìn)行gus報(bào)告基因檢測(cè)，將GUS檢測(cè)胚乳呈陽性的糙米發(fā)苗，種植得到T₁植株，PCR檢測(cè)進(jìn)一步確定T₁代植株是否含有Lc基因；

（4）?從含有Lc基因的T₁代植株上收獲T₂代種子，繼續(xù)種植T₂代種子獲得T₂代幼苗，采用PCR檢測(cè)目的基因Lc，篩選得到無Lc基因分離的轉(zhuǎn)基因純合后代。

6.一種快速培育高黃酮含量紅米水稻的方法，其特征在于，步驟包括：

（1）?將表達(dá)載體B和含有玉米花色素苷調(diào)節(jié)基因Lc的表達(dá)載體A導(dǎo)入白米水稻受體組織：將含有表達(dá)載體A的根癌農(nóng)桿菌和含有表達(dá)載體B的根癌農(nóng)桿菌按照6～10：1的比例混合，與白米水稻受體組織共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化白米水稻受體組織；

或利用基因槍法，將表達(dá)載體A和表達(dá)載體B按照6～10：1的比例混合，轉(zhuǎn)化白米水稻受體組織；

表達(dá)載體A中依次包含啟動(dòng)子、5’UTR序列、玉米花色素苷調(diào)節(jié)基因Lc和終止子；表達(dá)載體B中包括潮霉素抗性基因和gus報(bào)告基因；

所述啟動(dòng)子選自水稻中貯藏蛋白質(zhì)基因的啟動(dòng)子，所述5’UTR序列為啟動(dòng)子所屬同一基因單元的5’UTR序列；

（2）?用潮霉素篩選轉(zhuǎn)化后的水稻受體組織，進(jìn)行再生和種植，并篩選獲得含有Lc基因的T₀代植株；

從含有Lc基因的T₀代植株收獲T₁代種子，篩選呈紅米的后代；

（3）?對(duì)T₁代紅米進(jìn)行gus報(bào)告基因檢測(cè)，將GUS檢測(cè)胚乳呈陰性的糙米發(fā)苗，種植得到T₁植株；經(jīng)目的基因PCR檢測(cè)保留含有Lc基因的T₁代植株；

（4）?從含有Lc基因的T₁代植株上收獲T₂代種子，繼續(xù)種植T₂代種子獲得T₂代幼苗，采用PCR檢測(cè)目的基因Lc，篩選得到無Lc基因分離的轉(zhuǎn)基因純合后代。