[發明專利]基于MCP-1設計的核酸疫苗佐劑及其構建方法

無效

• 申請號: 201010295542.8
• 申請日: 2010-09-28
• 公開（公告）號: CN102038951A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發明（設計）人: 孫樹漢;章意亮;郭灜軍;魏偉;周奇;王越
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;C12N15/19;C12N15/63
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 丁振英

技術領域

本發明涉及醫藥生物學技術領域，尤其涉及核酸疫苗的免疫活性增強技術領域。

背景技術

核酸疫苗指含有某種抗原蛋白基因序列的質粒載體作為疫苗，直接導入動物細胞內，通過宿主的轉錄系統合成抗原蛋白，誘導宿主產生對該抗原蛋白的免疫應答，從而使得宿主獲得相應的免疫保護。由于核酸疫苗能夠誘導機體產生全面的免疫應答，并且對不同亞型的病原體具有交叉抵御作用，同時又具有免疫保護效果持久、安全、生產方便等一系列優點，故被認為是繼減毒、滅活疫苗和基因工程亞單位疫苗之后的第三代疫苗。核酸疫苗的優點主要有：1、不僅可以誘導針對保守抗原的保護性抗體產生，而且可以同時激發機體的CTL免疫，這樣對象病毒感染性疾病等依賴細胞免疫清除病原的疾病的預防也就更加有效。而且，基因疫苗接種后，抗原在細胞內的表達與病毒自然感染過程中病毒抗原的表達一致，能夠使抗原以自然的形式被加工后遞呈給免疫識別系統。這對于構象型抗原表位誘發中和性抗體的產生是必要的；2、制備簡便，省時省力基因疫苗的制備只需對編碼抗原的基因進行設計和克隆，不需在體外表達和純化蛋白質，且外源基因較容易克隆進表達載體，數天內可擴增并純化之，特別是對那些在流行病暴發時可快速開發新的疫苗。3、免疫應答較持久，文獻報道在肌注后15個月可用PCR檢測到外源質粒DNA的存在。有實驗證明在注射后19個月仍可檢測到外源基因相當數量的表達。這樣外源基因及其表達持續存在，使得機體中特異的免疫記憶細胞的記憶被強化，從而使機體獲得的保護性免疫較持久存在。4、同種異株交叉保護這是基因疫苗的最大優點之一。在制備基因疫苗時，可通過對基因表達載體所攜帶的靶基因進行改造，從而選擇抗原決定簇。選擇某一病原體的編碼保守蛋白的核酸序列作為基因疫苗，因其不會變異，故可對同一種病原的漂變或新型產生交叉免疫，從而起到免疫保護作用。5、可用于腫瘤防治CTL應答也是機體殺死癌變細胞的有效清除途徑。若能找到在細胞惡性轉化過程中的關鍵蛋白，就能制備腫瘤的CTL疫苗。該基因疫苗接種后，可誘發機體產生CTL免疫應答，對細胞的惡變進行免疫監視，對癌變的細胞產生免疫應答，從而為癌癥的預防和免疫治療提供強有力的新式武器。

然而，DNA疫苗也存在著明顯的不足，即DNA疫苗刺激機體產生免疫應答的能力往往比常規疫苗接種引起的免疫反應弱，這就給DNA疫苗的研究提出了新的挑戰。因此，新型疫苗佐劑已成為當今倍受關注的研究熱點。免疫佐劑是指與抗原同時或預先應用，能促進、延長或增強對疫苗抗原特異性免疫應答的物質。目前在動物疫苗的配制中使用最廣泛的是油佐劑和鋁鹽佐劑等，而作為DNA疫苗的佐劑主要有細胞因子、共刺激分子、CpG?DNA和脂質體(參見文獻，Jalilian?B.et?al.Development?of?avian?influenza?virus?H5DNA?vaccine?and?MDP-1gene?of?Mycobacterium?bovis?as?genetic?adjuvant.Genet?Vaccines?Ther.2010May24；8：4.)。

MCP-1(monocyte?chemoattractant?protein-1，單核細胞趨化蛋白-1)屬趨化因子CC亞家族，包括MCP1～3，可由炎癥介質刺激的單核/巨噬細胞、成纖維細胞、B細胞、內皮細胞和平滑肌細胞等分泌，對單核/巨噬細胞有趨化和激活作用。MCP-1也可介導嗜堿性粒細胞趨化和激活。研究發現，通過注射MCP-1可以使抗原特異性免疫反應顯著增強，并顯著增加DC的數量和頻率，MCP-1可與多種細胞因子有協同作用，是一種良好的DC擴增劑，在小動物和人的體內及體外進行實驗都取得了良好的效果(參見文獻，Seubert?A，Monaci?E，Pizza?M，O′Hagan?DT，Wack?A.The?adjuvants?aluminum?hydroxide?andMF59induce?monocyte?and?granulocyte?chemoattractants?and?enhance?monocyte?differentiation?toward?dendritic?cells.J?Immunol.2008Apr?15；180(8)：5402-12.)。而抗原特異性免疫應答的誘生很大程度上取決于機體對該抗原分子的處理和提呈的效率。基于DC在基因免疫中的重要作用，如果招募包括DC在內的APC至靶抗原所在部位，增加抗原的攝取和提呈，則可能利于增強基因免疫的效果。

但是，現有的核酸疫苗佐劑中，并沒有基于MCP-1設計的核酸疫苗佐劑的研究報道和相關專利。

發明內容