[發明專利]一種嗜酸乳桿菌復合抗冷凍因子

有效

• 申請號: 201010295048.1
• 申請日: 2010-09-29
• 公開（公告）號: CN101962617A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發明（設計）人: 陳合;王磊;馬齊;舒國偉;秦濤
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12R1/23
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 汪人和

技術領域

本發明涉及一種嗜酸乳桿菌復合抗冷凍因子。

背景技術

隨著奶業市場的發展，特別是人們健康意識的逐步增強，食品、保健品及醫藥等的安全性越來越受到人們的關注。含有益生菌的微生態制劑正作為一個新的領域逐步被研究和開發。嗜酸乳桿菌作為益生菌的一種，在促進人體健康和預防疾病方面具有重要作用，并日益成為乳品科學研究的熱點。嗜酸乳桿菌菌粉已廣泛應用于食品、醫藥等行業中，已經成為現代重要工業原料

真空冷凍干燥(簡稱凍干)是制備和保存生物材料最有效的方法之一，凍干是冷凍和干燥技術的有機結合。然而，真空冷凍干燥會造成生物細胞的損傷、死亡及某些酶蛋白分子的鈍化。為了提高真空冷凍干燥后微生物的存活率，人們進行了大量的研究。影響乳酸菌凍干效果的因素有很多，如菌株、細胞大小及形狀、生長階段及速率、初始細胞濃度、pH值、保護劑種類與配比、預凍溫度、降溫速率、冷凍干燥條件、細胞含水量、細胞膜成份等。

在發酵液中添加一些物質能夠抑制冷凍干燥過程中共晶現象的發生，減少蛋白損傷，提高菌體抗冷凍能力。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種嗜酸乳桿菌復合抗冷凍因子，在制備菌粉的過程中加入本發明復合抗冷凍因子，其菌粉存活率達76.5％。

為實現上述目的，本發明提供了一種嗜酸乳桿菌復合抗冷凍因子，其配方為：肌醇0.1-0.2g/L、氯化鈉3-4g/L、牛血清蛋白0-0.07g/L、丙氨酸0.03-0.06g/L。

與現有技術相比，本發明至少具有以下優點：在培養基中添加本發明的復合抗冷凍因子后，可以使嗜酸乳桿菌在冷凍干燥過程中的存活率最高達76.5％，而如果沒有添加該復合抗冷凍因子，則菌體在冷凍干燥過程中的存活率最高僅52.7％。

具體實施方式

實施例一：

將微孔濾膜除菌的復合抗冷凍因子添加至MRS培養基中培養24h，然后以轉速為6000r/min離心10min，收集菌體，然后，用生理鹽水清洗菌體2次，離心棄去上清液；用保護劑I將菌體配制成8±1×10¹⁰cfu/mL菌懸液后，靜置30-40min，再加入保護劑II均勻混合，其中，所述保護劑II與保護劑I的體積比為1∶1，然后，靜置20-30min后裝于凍干管中，裝樣高度0.3-0.5cm，接著放入-35～-40℃的冰箱中預凍24h后，移轉入真空冷凍干燥機中，于溫度為-56℃，真空度為4-6Pa的條件下凍干24h；最后，用生理鹽水復溶，MRS固體培養基計數，測定菌粉活性和菌體存活率，所述保護劑I的配方為：海藻糖10g/L+甘油20mL/L+牛血清蛋白10g/L+氯化鈉8.5g/L+蔗糖80g/L；保護劑II的配方為：脫脂奶粉150g/L+葡萄糖10g/L+氯化鈉8.5g/L+抗壞血酸0.2g/L。

所述復合抗冷凍因子的配方如下表1所示：

表1添加不同配比的復合抗冷凍因子發酵得到的菌體進行凍干的存活率的驗證結果

實施例2

實施例2的真空冷凍干燥方法與實施例1完全相同，其中，復合抗冷凍因子的配方采用：肌醇0.1g/L、氯化鈉3g/L、牛血清蛋白0.07g/L、丙氨酸0.03g/L；保護劑I的配方采用：海藻糖10g/L+甘油20mL/L+牛血清蛋白10g/L+氯化鈉8.5g/L+蔗糖80g/L；保護劑II的配方采用：脫脂奶粉150g/L+葡萄糖10g/L+氯化鈉8.5g/L+抗壞血酸0.2g/L，所述保護劑I與保護劑II的體積比如下表2所示：

表2菌懸液的保護劑I與保護劑II不同體積配比對凍干制備嗜酸乳桿菌菌粉存活率的驗證結果