[發(fā)明專(zhuān)利]艾滋病病毒靶細(xì)胞CD4+T細(xì)胞易感和支持HIV-1的特異表達(dá)miRNA群

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010293265.7
• 申請(qǐng)日: 2010-09-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101974531A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-02-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張華堂;徐雯雯;韓妙君;陳玲;郭彥
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/113
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/113;C12Q1/68
• 代理公司: 昆明今威專(zhuān)利代理有限公司 53115
• 代理人: 楊宏珍

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及艾滋病病毒靶細(xì)胞CD4+T細(xì)胞易感和支持HIV-1的特異表達(dá)miRNA群。具體的講是在人microRNA組范圍內(nèi)篩選艾滋病相關(guān)miRNA，利用細(xì)胞模型和基因芯片技術(shù)相結(jié)合的方法建立的艾滋病病毒靶細(xì)胞CD4+T細(xì)胞易感和支持HIV-1的特異表達(dá)miRNA群，屬生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

microRNA(miRNA)是新近發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)約有18-24個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編碼小分子單鏈RNA，通過(guò)不完全互補(bǔ)的方式與編碼蛋白mRNA的3’端非編碼區(qū)結(jié)合，引起靶mRNA的降解、活性降低或翻譯受抑，從而在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。miRNA在細(xì)胞的個(gè)體發(fā)育、增殖、凋亡、分化和應(yīng)激中扮演著重要的角色，與腫瘤、心臟病、糖尿病和艾滋病等多種疾病都有著密切聯(lián)系，某些miRNA的產(chǎn)生過(guò)程與HIV-1(human?immunodeficiency?virus-type?1，人類(lèi)免疫缺陷病毒)的生活周期相關(guān)聯(lián)。因此推測(cè)在艾滋病的發(fā)生過(guò)程中，存在特征性的miRNA表達(dá)譜。

HIV-1天然的靶細(xì)胞CD4+T細(xì)胞的活化和增殖是HIV-1得以大量繁殖和廣泛播散的先決條件，1996年Levine等人意外發(fā)現(xiàn)，經(jīng)同時(shí)包被在磁珠上的CD3、CD28抗體(“CD3/CD28?beads”)刺激后，活化、增殖的CD4+T細(xì)胞，反而獲得了既能抵抗感染又能清除病毒的能力——來(lái)自HIV-1感染者的CD4+T細(xì)胞活化后，能逐漸清除已感染的病毒，來(lái)自健康成人的CD4+T細(xì)胞活化后，能抵抗HIV-1而不被感染。我們以此特殊效應(yīng)為基礎(chǔ)，同時(shí)以高度易感并促進(jìn)病毒增殖的PHA/IL-2活化細(xì)胞為反證，構(gòu)建細(xì)胞模型并篩選出艾滋病相關(guān)的miRNA表達(dá)圖譜，用以直接篩選安全有效的抗艾滋細(xì)胞藥物。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于提供艾滋病病毒靶細(xì)胞CD4+T細(xì)胞易感和支持HIV-1的特異表達(dá)miRNA群。

本發(fā)明采用高通量的人microRNA芯片，通過(guò)比較未刺激、CD3/CD28磁珠刺激及PHA/IL-2刺激三種狀態(tài)的CD4+T細(xì)胞miRNA表達(dá)差異，篩選得到一組艾滋病病毒靶細(xì)胞CD4+T細(xì)胞易感和支持HIV-1的特異表達(dá)miRNA群，共包含12個(gè)miRNA，其部分或全部組合作為排除抗艾滋細(xì)胞藥物的標(biāo)志；該群miRNA在CD4+T細(xì)胞抵抗和清除HIV-1狀態(tài)時(shí)低表達(dá)，miRNA群中的12個(gè)miRNA的名稱(chēng)及序列見(jiàn)表1；

表1易感和支持HIV-1的特異表達(dá)miRNA群(共12個(gè)miRNA)

本發(fā)明中的特異表達(dá)miRNA群中的各miRNA所調(diào)控的靶基因均參與了造成不同生物學(xué)效應(yīng)的顯著功能(Gene?Ontology，GO)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路(pathway)，同時(shí)在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)(Signal-Net)和基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)(GeneRelNet)中處于關(guān)鍵結(jié)點(diǎn)或重要地位，因此最具有代表意義。

附圖說(shuō)明：

圖1顯示抵抗和清除狀態(tài)(B)中特異低表達(dá)miRNA。

具體實(shí)施方式：

本發(fā)明通過(guò)采用高通量的人miRNA芯片，比較未刺激、CD3/CD28磁珠刺激(B)及PHA/IL-2刺激(P)三種狀態(tài)的CD4+T細(xì)胞miRNA表達(dá)差異，篩選得到一組艾滋病病毒靶細(xì)胞CD4+T細(xì)胞易感和支持HIV-1的特異表達(dá)miRNA群，共包含12個(gè)miRNA。具體步驟如下：

1.樣本的選擇和處理