[發(fā)明專利]一種提取純化海膽苷的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010293231.8
• 申請日: 2010-09-27
• 公開（公告）號: CN102040634A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉東鋒;郭琴;楊成東
• 申請（專利權(quán)）人: 南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C07H15/18
• 分類號: C07H15/18;C07H1/08
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技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于天然植物提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種提取純化海膽苷的方法。

背景技術(shù)：

海膽苷，又名松果菊苷，是一種苯乙醇苷，分子式：C₃₅H₄₆O₂₀，分子量：786.73，分子結(jié)構(gòu)式如下圖：

國內(nèi)從植物提取海膽苷，原料主要是肉蓯蓉、管花肉蓯蓉的帶鱗葉的肉質(zhì)莖，肉蓯蓉為我國二級保護品種，是傳統(tǒng)的名貴中藥材，現(xiàn)有提取工藝主要是有機溶劑提取、正丁醇萃取、大孔樹脂吸附、硅膠柱層析純化分離等制備方法。如中國專利CN200410069054.X提出低碳醇提取、大孔吸附樹脂吸附，提率較低，產(chǎn)品不穩(wěn)定。專利CN101214281A提出的“一種肉蓯蓉提取物的生產(chǎn)方法”，通過細胞破碎、漿液萃取、大孔樹脂吸附及層析分離提純、高溫滅酶、噴霧干燥等工藝的系統(tǒng)集成，產(chǎn)率不穩(wěn)定，不易控制。馬春梅等發(fā)表的“管花肉蓯蓉中松果菊苷的提取和純化”，該文獻以10倍量75％乙醇回流提取2次，每次1小時，通過HPD-100大孔吸附樹脂純化，所得到的松果菊苷含量低。

松果菊苷具有體外清除活性氧自由基、體內(nèi)抗氧化，抗衰老功用；能抑制TNFα誘導(dǎo)的SH-SY5Y細胞凋亡，其神經(jīng)細胞保護作用可能與降低細胞內(nèi)活性氧水平，抑制caspase-3的活性和維持線粒體膜電位的高能狀態(tài)有關(guān)，對MPTP致小鼠PD模型的行為學(xué)障礙具有改善作用，其神經(jīng)保護作用機制可能與膽綠素還原酶B水平降低有關(guān)。

楊愛梅等從圓穗兔耳草中分離得到海膽苷等苯丙素苷類化合物，圓穗兔耳草(Lagotisramalana)是玄參科兔耳草屬植物。生于海拔5300米高山、草地、冰河、水坡。分布于青海、甘肅及四川西北部，為藏藥，味苦、性寒，有清熱、涼血、解毒功能，用于五臟有熱、血分熱毒、體虛潮熱、高血壓、急慢性肝炎、痔瘡，有體外抑菌、抗炎和降血糖的藥理作用。苯丙素類化合物具有顯著的抗病毒、抗菌、抗腫瘤、抗氧化、抗血小板凝集和降脂及抑制白三烯B4合成等作用。圓穗兔耳草中的海膽苷含量較高，可代替肉蓯蓉作為提取海膽苷的原料，具有很好的開發(fā)利用價值。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種從圓穗兔耳草中提取純化海膽苷的方法。

本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

一種提取純化海膽苷的方法，其特征在于包括以下步驟：取干燥的圓穗兔耳草粉碎至40-80目，加入4-14倍70-100％乙醇溶液，微波提取2-4次，每次20-120分鐘，得提取液，減壓回收乙醇后，加入氧化鎂層析柱，水乙醇梯度洗脫，收集洗脫液，洗脫液用超濾膜超濾機納濾膜濃縮，濃縮液干燥得濃縮物，將濃縮物用高速逆流色譜儀分離，以氯仿-甲醇-水為溶劑分離系統(tǒng)，減壓蒸干溶劑即得海膽苷。

所述微波功率為400-800W。

所述氧化鎂為100-200目氧化鎂，柱徑高比為1∶10-20，洗脫劑為7-9BV水→3-5BV20-50％乙醇→5-8BV60-95％乙醇。

所述超濾膜選截留分子量3000-10000的中空復(fù)合膜，納濾膜選截留分子量100的中空復(fù)合膜，進口壓力控制0.5-0.9Mpa。

所述氯仿-甲醇-水的體積比為(5-15)∶(2-8)∶(5-9)。

本發(fā)明的優(yōu)勢在于以圓穗兔耳草為原料，成本低；采用微波提取，提取時間短、提取效率高，采用的溶劑均為易回收、無毒或低毒的有機溶劑；采用氧化鎂柱層析富集純化，減輕了后面工序的工作量；采用高速逆流色譜分離效果好，產(chǎn)品純度高。

具體實施方式：

實施例1：

取圓穗兔耳草粉碎至60目，稱取500g投入微波萃取罐，加入2kg90％乙醇溶液微波提取60分鐘，功率400W，放出提取液，再加入90％乙醇提取2次，合并三次提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇至少量，加入氧化鎂柱層析(100-200目，柱徑高比1∶10)，依次用7BV水→3BV40％乙醇→6BV90％乙醇洗脫，高效液相色譜監(jiān)測，收集流分，洗脫液加入截留分子量5000的中空復(fù)合膜超濾膜超濾，透過液再加入截留分子量100中空復(fù)合納濾膜濃縮，進口壓力控制0.5-0.7Mpa得濃縮液，將濃縮液低溫干燥得濃縮物；取氯仿-甲醇-水(7∶3∶5)置于分液漏斗中混合均勻，取上相為固定相，下相為流動相，取上述濃縮物溶于流動相中備用，開啟高速逆流色譜儀，設(shè)定流動相流速為1.8ml/min，同時開啟主機電機，自流動相流出時開始進樣，轉(zhuǎn)速控制為850rpm，通過檢測器收集海膽苷流分，濃縮并干燥得海膽苷，高效液相檢測含量為98.7％。

實施例2：