[發明專利]一種聚酯類纖維載體培養細胞以制備病毒或生產疫苗的方法

無效

• 申請號: 201010292396.3
• 申請日: 2010-09-26
• 公開（公告）號: CN102406926A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 李敏;馮見;高迪晶;齊念民
• 申請（專利權）人: 上海泰因生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K39/295;C12N7/00;C12N5/07;A61P31/12
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

技術領域

本發明涉及生物技術制藥領域，具體是一種聚酯類纖維載體培養細胞以制備病毒或生產疫苗的方法。

背景技術

疫苗是將病原微生物(如細菌、立克次氏體、病毒等)及其代謝產物，經過人工減毒、滅活或利用基因工程等方法制成的用于預防傳染病的自動免疫制劑。疫苗作為一種特殊的藥物，作為免疫學經驗理論和生物技術共同發展而產生的生物制品，從防患于未然的角度消除了眾多傳染病對動物生命的威脅，保證了人體健康，也促進了養殖業的健康發展，在國計民生的健康發展中起到了巨大的作用。

疫苗的發現可謂是人類發展史上一件具有里程碑意義的事件。因為從某種意義上來說人類繁衍生息的歷史就是人類不斷同疾病和自然災害斗爭的歷史，控制傳染性疾病最主要的手段就是預防，而接種疫苗被認為是最行之有效的措施。而事實證明也是如此，威脅人類幾百年的天花病毒在牛痘疫苗出現后便被徹底消滅了，迎來了人類用疫苗迎戰病毒的第一個勝利，也更加堅信疫苗對控制和消滅傳染性疾病的作用。

疫苗的生產主要是通過病毒在細胞內增殖得到的。病毒是嚴格的細胞內寄生物，不能在任何無細胞的培養液內生長。在細胞培養技術不成熟之前，人們為研究病毒，往往采用雞胚接種或動物接種的方法來分離，鑒定病毒或制備一定量的病毒液。隨著細胞培養技術的發展首先在病毒學研究方面獲得了廣泛的應用，為病毒的增值，鑒定提供了來自不同動物，不同組織的細胞來源。通過不同病毒對不同細胞的敏感性篩選，目前絕大多數病毒均可由相應的敏感細胞，為病毒的分離，鑒定和增值創造了條件，同時也為病毒的大量生產提供了細胞來源。目前疫苗的工業化生產主要是通過雞胚細胞培養的方法。培養方法包括靜置培養，轉動培養，懸浮培養。隨著動物生物疫苗生產工藝的發展，傳統的用動物和雞胚繁殖病毒的方法已經遠不能滿足大規模工業化生產的要求。常用的單層靜置培養和轉瓶培養技術由于細胞生長的表面積小，產量低，占用空間大，勞動強度大，不能滿足日益增長的對細胞產品的需求。

近些年，貼壁細胞的載體培養技術是一種新興的大規模細胞培養技術，是當前貼壁依賴型細胞大規模培養的主要方法。通過對細胞沒有毒副作用的載體介質，細胞貼附于載體表面或內部，可以大大提高細胞培養面積和效率，比如微載體培養技術，具有均相培養兼具平板培養和懸浮培養的優勢，培養條件(溫度、pH值、二氧化碳濃度等)容易控制，并且培養過程系統化、自動化，不易被污染。隨著人們對疾病預防需求的加強，對疫苗質量，產量的要求也隨之提高，同時企業要適應市場需求，提高利潤等原因，促成新的大規模生產疫苗的方法在不斷完善，使用載體培養細胞的方法必將被廣泛應用，而且也是今后規模化生產的發展趨勢。但是，目前市面上的細胞載體(例如Cytodex系列微載體)大多價格昂貴，不適于工業化大規模培養細胞制備病毒或生產疫苗。

經對現有技術文獻的檢索發現，Rourou?S，Majoul?S，Trabelsi?K，Kallel?H.等人在《Appl?Microbial?Biotechnol》2009；85(1)：53-63.上發表的“A?novel?animal-component-free?medium?for?rabies?virus?production?in?VERO?cells?grown?on?Cytodex?1?microcarriers?in?a?stirred?bioreactor”(“一個用于cytodex1微載體VERO細胞攪拌式生物反應器培養生產狂犬病病毒的創新的無動物成分培養基”，《應用微生物生物技術》)中，報道了使用Cytodex?1微載體進行狂犬病病毒的生產。目前常用的商品化微載體有Cytodex系列、Biosilon系列、Solo微載體等，這些微載體對用于細胞培養制備病毒或生產疫苗來說，價格往往過于昂貴，用于大規模生產成本大，不適合進行工業化生產；同時，作為成型商品，這些細胞載體的形狀和大小已經固定，不易加以改動，影響了相應工藝的設計、改進和優化。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有常見細胞載體的缺陷，實現簡便高效廉價的病毒疫苗生產。發明人經過研究開發，提供了利用一種價格低廉、易于切割加工的無紡布(聚酯類纖維)作為細胞培養載體，在細胞培養系統中培養擴增病毒敏感細胞，并接種增殖目標病毒，實施工業化大規模病毒制備或疫苗生產。