[發(fā)明專利]免疫多糖法培育廣譜抗病海水養(yǎng)殖動物的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010292211.9
• 申請日: 2010-09-27
• 公開（公告）號: CN102017918A
• 公開（公告）日: 2011-04-20
• 發(fā)明（設計）人: 丁君;王軼南
• 申請（專利權）人: 大連海洋大學
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 大連非凡專利事務所 21220
• 代理人: 曲寶威

技術領域

本發(fā)明涉及一種培育海水養(yǎng)殖動物(包括海參、海膽等海水養(yǎng)殖動物)的方法，特別是一種免疫多糖法培育廣譜抗病海水養(yǎng)殖動物的方法。

背景技術

近年來，隨著海水養(yǎng)殖環(huán)境惡化，海水養(yǎng)殖動物特別是海參、海膽等重要經(jīng)濟養(yǎng)殖動物病害頻發(fā)，嚴重影響著重要經(jīng)濟養(yǎng)殖動物的產(chǎn)量，通過遺傳育種手段，培育高產(chǎn)、抗逆海參、海膽等海水養(yǎng)殖動物新品種迫在眉睫。目前培育抗病海水養(yǎng)殖動物必須進行感染試驗，要經(jīng)過病原菌分離、培養(yǎng)、感染、計算存活率等途徑，步驟繁瑣，過程復雜，并且有些病原菌無法培養(yǎng)或培養(yǎng)困難，感染的最適劑量難以確定，風險性大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種過程簡單、容易操作、無風險的免疫多糖法培育廣譜抗病海水養(yǎng)殖動物的方法，克服現(xiàn)有技術的不足。

本發(fā)明的免疫多糖法培育廣譜抗病海水養(yǎng)殖動物的方法，步驟如下：

a、建立至少100個海水養(yǎng)殖動物育種家系，每個家系的海水養(yǎng)殖動物數(shù)量至少100個，并使各家系的生長環(huán)境和餌料供應狀況相同；

b、取上述海水養(yǎng)殖動物的成體，在每個家系中隨機抽取10個海水養(yǎng)殖動物個體，測量每個海水養(yǎng)殖動物的溶菌酶、SOD、CAT、總抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量；計算每個家系中海水養(yǎng)殖動物的溶菌酶、SOD、CAT、總抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B1，以此作為家系免疫活性的表征值；

c、利用多糖浸泡液對上述海水養(yǎng)殖動物個體進行免疫刺激，多糖浸泡液濃度為0.001g/L-0.007g/L，浸泡時間為24小時-72小時；

d、再次測量上述海水養(yǎng)殖動物個體的溶菌酶、SOD、CAT、總抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量，計算刺激后刺免疫多糖每個家系中海水養(yǎng)殖動物的溶菌酶、SOD、CAT、總抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B2；

e、計算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指標的改變量，根據(jù)海水養(yǎng)殖動物的種類不同和育種目標不同，確定加權值A，對各指標變化的絕對值進行加權；

f、計算各家系的平均綜合選擇指數(shù)I

I＝A_溶菌酶|B2-B1|_溶菌酶+A_SOD|B2-B1|_SOD+A_CAT|B2-B1|_CAT+A_{總抗氧化力}|B2-B1|_{總抗氧化力}+A_丙二醛|B2-B1|_丙二醛+A_吞噬效率×|B2-B1|_吞噬效率；

g、根據(jù)各家系的平均綜合選擇指數(shù)I，上選30％的家系，按雌雄比3∶1的比例，在避免近親交配的情況下，再次建立海水養(yǎng)殖動物育種家系至少100個；

h、循環(huán)a～g步驟至少4次，獲得廣譜抗病海水養(yǎng)殖動物；

所述的海水養(yǎng)殖動物為海參、海膽等。

本明的免疫多糖法培育廣譜抗病海水養(yǎng)殖動物的方法，實施過程簡單，易控制，好操作，安全高效，無任何風險。

具體實施方式

以海膽為例，具體操作步驟如下：

a、建立120個海膽育種家系，每個家系的海膽數(shù)量150個，并使各家系的生長環(huán)境和餌料供應狀況相同；

b、養(yǎng)殖6個月后，在每個家系中隨機抽取10個海膽個體，測量每個海膽的溶菌酶、SOD、CAT、總抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量；然后根據(jù)測量的參數(shù)計算出每個家系中海膽的溶菌酶、SOD、CAT、總抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B1，以此作為家系免疫活性的表征值；

c、利用多糖浸泡液對上述海膽個體進行免疫刺激，多糖浸泡液濃度為0.001g/L～0.005g/L，浸泡時間為24小時～72小時；其中多糖可為香菇多糖、黃芪多糖或脂多糖；

d、再次測量上述海膽個體的溶菌酶、SOD、CAT、總抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量，并計算刺激后刺免疫多糖每個家系中海膽的溶菌酶、SOD、CAT、總抗氧化力活性和吞噬效率及丙二醛含量的平均值B2；

e、計算出免疫多糖刺激前后各家系免疫指標的改變量，對各指標變化的絕對值進行加權，在海膽中，A_溶菌酶為0.3，A_SOD為0.1，A_CAT為0.1，A_{總抗氧化力}為0.2，A_丙二醛為0.1，A_吞噬效率為0.2；

f、計算各家系的平均綜合選擇指數(shù)I