[發明專利]一種減毒活疫苗及其應用

無效

• 申請號: 201010292145.5
• 申請日: 2010-09-26
• 公開（公告）號: CN102114241A
• 公開（公告）日: 2011-07-06
• 發明（設計）人: 顧江;朱鳳才;毛旭虎;鄒全明
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: A61K39/02
• 分類號: A61K39/02;A61P31/04
• 代理公司: 重慶志合專利事務所 50210
• 代理人: 胡榮琿

技術領域

本發明涉及一種疫苗，尤其涉及一種減毒活疫苗及其應用。

背景技術

腸出血性大腸桿菌(enterohermorrhangic?E.coli，EHEC)O?157:H7(EHECO157)是一種重要的人畜共患傳染病病原，其感染已成為全球性的公共衛生問題。自1982年該菌首次被確認為嚴重致病菌以來，全球很多國家和地區包括中國都多次爆發流行。EHEC?O157感染宿主可導致腹瀉、出血性腸炎、溶血尿毒綜合癥等疾病和嚴重并發癥。由于抗生素治療可加劇感染病情的危險，目前尚無有效的預防和控制措施。EHEC?O157菌培養容易、感染力強、傳播途徑多樣，使其極有可能作為未來軍事斗爭的細菌武器和生物恐怖戰劑，EHEC?O157菌的烈性致病因子還有可能用于基因武器的構建。美國疾病控制中心已將其列為B類生物恐怖病原體嚴加防范。因此，無論從公共衛生還是生物反恐的需要出發，研制EHEC?O157疫苗，加強其防控研究具有重大的戰略意義。

EHEC?O157引起宿主嚴重的感染性疾病主要通過三個方面來實現的。1)志賀毒素(shiga?toxin，Stx)：志賀毒素在細胞表面受體結合介導下進入細胞，抑制細胞蛋白質的合成，最終導致組織嚴重病理損傷，引發感染性疾病；2)EHECO157通過表面抗原和炎癥刺激因子(OmpA、intimin等)的作用，誘導腸道感染部位劇烈炎癥反應，導致電解質平衡紊亂；3)粘附與擦拭損傷(Attaching?andeffacing?lesions，A/E?lesions)：細菌緊密粘附于腸上皮細胞表面，通過一系列信號轉導蛋白的相互作用(intimin-Tir，Tir-Cortactin，TCCP-N-WASP等)，引起細菌粘附部位肌動蛋白的聚集，導致微絨毛破壞、刷狀緣損傷等腸上皮細胞特征性病例改變，細胞屏障功能破壞，引發感染性疾病。

OmpA、Intimin和Stx2B為腸出血性大腸桿菌O157:H7的重要致病因子，同時也是細菌的保護性抗原，目前已經有證據表明體內的抗OmpA(Torres?AG，Kaper?JB?et?al.Infect?Immun?2003?Sep；71(9)：4985-95.)、抗intimin(Gu，J.，Y.Liu，etal._Microbes?Infect?2009?11(10-11)：835-841)和抗Stx2B(Ma，Y.，X.Mao，et?al.Immunol?Lett?2008121(2)：110-115.)的抗體能夠保護致死劑量的腸出血性大腸桿菌O157:H7的感染。

發明內容

本發明的目的在于提供一種減毒活疫苗，其保藏號為：CCTCC?M?2010185。

所述減毒活疫苗，包含腸出血性大腸桿菌O157:H7的抗原。

所述抗原具有抗原OmpA、Intimin和Stx2B。

減毒活疫苗在制備預防腸出血性大腸桿菌O157:H7感染的制劑中的應用。

所述應用中的減毒活疫苗誘導產生保護性的抗OmpA、Intimin和Stx2B的抗體。

EHEC?O157菌本身培養方便，經濟。在經保藏號為CCTCC?M?2010185的減毒活疫苗免疫的小鼠血清中檢測到明顯的抗腸出血性大腸桿菌O157:H7菌株的抗體，且小鼠經過強毒株攻毒時具有一定的保護性。

本發明所述的減毒活疫苗菌株制備方便，本身帶有腸出血性大腸桿菌O157:H7的全部抗原，能夠刺激系統性抗腸出血性大腸桿菌O157:H7免疫反應，具有較好的保護性效果。

本發明所述的減毒活疫苗已于2010年7月23日保藏，其保藏號為CCTCCNO：M2010185；保藏單位：中國典型培養物保藏中心；地址：湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學；分類命名：腸出血性大腸桿菌EHECO157:H700B015(Enterohemorrhagic?Escherichia?coli?EHEC?O157:H700B015)。

具體實施方式

下面提供的實施例用于進一步闡明本發明，而不構成對本發明范圍的限制。

實施例1?腸出血性大腸桿菌O157:H7菌株00B015(保藏號為CCTCC?M?2010185)刺激的免疫反應

1實驗方法

1)腸出血性大腸桿菌O157:H7菌株00B015的分離鑒定：