[發明專利]鎮痛活性肽VGG及其制備與應用

無效

• 申請號: 201010291461.0
• 申請日: 2010-09-26
• 公開（公告）號: CN101985467A
• 公開（公告）日: 2011-03-16
• 發明（設計）人: 張景海;楊倬;劉巖峰;吳春福
• 申請（專利權）人: 沈陽藥科大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;A61K38/17;A61P29/00
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 李宇彤

1.鎮痛活性肽VGG，其特征在于，它是從蝎毒或蝎尾或全蝎提取、分離、純化獲得的如下氨基酸序列：

VKDGYIADDRNCPYFCGRNAYCDGECKKNRAESGYCQWASKYGNACWCYKLPDDARIMKPGRCNGG。

2.一種如權利要求1所述的鎮痛活性肽VGG的制備方法，通過提取、分離、純化獲得，其特征在于，它包括如下步驟：

(1)蝎毒或蝎尾或全蝎用蒸餾水或酸性溶液或堿性溶液溶解提取，離心除去不溶雜質得到抽提液；

(2)抽提液經疏水層析柱分離得到鎮痛活性組分I；

(3)得到鎮痛活性組分經超濾以去除鹽和雜蛋白，同時進行濃縮，通過離子交換層析柱分離得到鎮痛活性組分II；

(4)經疏水層析柱進一步分離得到鎮痛活性組分III；

(5)經超濾以去除鹽和濃縮，通過離子交換層析柱純化得到鎮痛活性組分IV；

(6)經凝膠過濾層析柱進一步純化得到鎮痛活性肽VGG；

(7)經反向層析柱得到高純度的鎮痛活性肽VGG。

3.根據權利要求2所述的鎮痛活性肽VGG的制備方法，由蝎毒或蝎尾或全蝎用蒸餾水或酸性溶液或堿性溶液溶解提取并經離心除去不溶雜質得到的抽提液，該抽提液可以通過疏水層析柱、離子交換層析柱、凝膠過濾層析柱的不同組合以及經超濾去除鹽、雜蛋白和濃縮得到鎮痛活性肽VGG，層析柱使用的不同組合特征在于，疏水層析柱-離子交換層析柱-疏水層析柱-離子交換層析柱-凝膠過濾，或凝膠過濾-疏水層析柱-離子交換層析柱-疏水層析柱-離子交換層析柱，或離子交換層析柱-疏水層析柱-離子交換層析柱-疏水層析柱-凝膠過濾，或凝膠過濾-離子交換層析柱-疏水層析柱-離子交換層析柱-疏水層析柱，或疏水層析柱-離子交換層析柱-疏水層析柱-凝膠過濾-離子交換層析柱等等的組合。

4.根據權利要求2或3所述的鎮痛活性肽VGG的制備方法，其特征在于，操作溫度0℃-45℃；溶液、緩沖溶液、層析洗脫液的酸堿度在pH2-pH12。

5.根據權利要求2或3所述的鎮痛活性肽VGG的制備方法，其特征在于，步驟(2)是將鎮痛活性成分的抽提液，用鹽酸水溶液或磷酸水溶液或酸性溶液或堿性溶液調pH至優選酸堿度為pH5-pH9下，加中性鹽至2M濃度，上樣于預先用2M中性鹽-緩沖液平衡的疏水層析柱，分別用2.0M、1.5M、1.0M、0.5M中性鹽-緩沖液洗脫，最后用緩沖液洗脫，將含有鎮痛活性的洗脫液合并。

6.根據權利要求2或3所述的鎮痛活性肽VGG的制備方法，其特征在于，步驟中疏水層析介質選自苯基-疏水層析添料或正辛烷-疏水層析添料或己烷-疏水層析添料或丁烷-疏水層析添料；中性鹽選自(NH₄)₂SO₄或Na₂SO₄或NaCl；中性鹽濃度在2.0M-1.0mM；緩沖液的濃度為1mM-100mM；洗脫模式是階段洗脫或梯度洗脫；梯度洗脫的中性鹽濃度在2.0M-1.0mM。

7.根據權利要求2或3所述的鎮痛活性肽VGG的制備方法，其特征在于，步驟的透過鎮痛活性肽VGG的超濾膜分子量選自10kDa、20kDa、30kDa、40kDa或50kDa的超濾膜；截留鎮痛活性肽VGG的超濾膜分子量選自1kDa、2kDa、3kDa或5kDa的超濾膜。

8.根據權利要求2或3所述的鎮痛活性肽VGG的制備方法，其特征在于，步驟中離子交換層析介質可選擇陽離子交換層析添料也可選擇陰離子交換層析添料；層析用的緩沖液pH選擇在pH2-pH12；緩沖液的濃度為1mM-100mM；洗脫模式可以是階段洗脫，也可以是梯度洗脫；階段洗脫分別用0.05M、0.1M、0.15M、0.2M、0.25M、0.3M、0.4M、0.5M鹽溶液進行洗脫；梯度洗脫的鹽濃度在0.001M-1.0M；鹽選自(NH₄)₂SO₄、Na₂SO₄、NaCl或KCl。