[發明專利]一種有核細胞標識方法及其應用

有效

• 申請號: 201010288213.0
• 申請日: 2010-09-19
• 公開（公告）號: CN101948901A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 李彩霞;胡蘭;朱典
• 申請（專利權）人: 公安部物證鑒定中心
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12Q1/68
• 代理公司: 北京同立鈞成知識產權代理有限公司 11205
• 代理人: 劉芳

1.一種有核細胞標識方法，其特征在于，該方法包括：

將含上述有核細胞的檢材放入含有緩沖液的離心管中，振蕩離心管，使檢材上的細胞脫落，獲得檢材細胞的細胞懸液；

將龍膽紫或蘇木素加入上述細胞懸液，進行染色；所述龍膽紫的終濃度為0.1～0.5μg/μl，染色時間為2～7分鐘；所述蘇木素的終濃度為1～7μg/μl，染色時間為3-7分鐘；

對上述染色后的細胞懸液中的有核細胞利用顯微鏡進行觀察和識別。

2.根據權利要求1所述的有核細胞標識方法，所述有核細胞的檢材為含口腔粘膜上皮細胞與表皮細胞的混合細胞的檢材，或含精子細胞和陰道上皮細胞的混合細胞的檢材。

3.根據權利要求2所述的有核細胞標識方法，所述有核細胞的檢材為含口腔粘膜上皮細胞與表皮細胞的混合細胞的檢材，所述龍膽紫的終濃度為0.2～0.3μg/μl，染色時間為3～5分鐘；所述蘇木素的終濃度為3～6μg/μl，染色時間為3～5分鐘。

4.根據權利要求2所述的有核細胞標識方法，所述有核細胞的檢材為含精子細胞和陰道上皮細胞的混合細胞的檢材，所述龍膽紫的終濃度0.15～0.35μg/μl，染色時間為4～7分鐘；所述蘇木素的終濃度為4.5～7μg/μl，染色時間為4～7分鐘。

5.權利要求1-4任一項所述的有核細胞標識方法在使用顯微操作儀捕獲法聯合LV-PCR的單細胞分離檢測平臺對混合檢材中的有核細胞進行DNA分型的應用。

6.權利要求1-4任一項所述的有核細胞標識方法在激光顯微切割法聯合LV-PCR的單細胞分離檢測平臺中對混合檢材中的有核細胞進行DNA分型的應用。

7.一種對混合檢材中的有核細胞進行DNA分型的方法，該方法包括：

將獲得的含有核細胞的檢材放入含有緩沖液的離心管中，振蕩離心管，使檢材上的細胞脫落，獲得檢材細胞的細胞懸液；

將龍膽紫或蘇木素加入上述細胞懸液，進行染色；所述龍膽紫的終濃度為0.1～0.5μg/μl，染色時間為2～7分鐘；所述蘇木素的終濃度為1～7μg/μl，染色時間為3～7分鐘；

將滅菌后的載玻片置于顯微鏡載物臺上，吸取上述染色后的細胞懸液滴加到載玻片上，使用顯微操作儀捕獲單個檢材細胞；

把捕獲的細胞置于低體積擴增反應玻片上，利用熒光標記復合擴增試劑盒進行LV-PCR擴增；

擴增結束后使用遺傳分析儀對LV-PCR擴增產物進行檢測獲得分型結果。

8.一種對混合檢材中的有核細胞進行DNA分型的方法，該方法包括：

將獲得的含有核細胞的檢材放入含有緩沖液的離心管中，振蕩離心管，使其上的細胞脫落，獲得檢材細胞的細胞懸液；

將龍膽紫或蘇木素加入上述細胞懸液，進行染色；所述龍膽紫的終濃度為0.1～0.5μg/μl，染色時間為2～7分鐘；所述蘇木素的終濃度為1～7μg/μl，染色時間為3～7分鐘；

將上述染色后的細胞懸液進行離心，棄掉上清液后獲得細胞沉淀，將細胞沉淀用30μl的緩沖液重懸后制作涂片；

使用激光顯微切割法捕獲上述涂片上的單個檢材細胞；

把捕獲的細胞置于低體積擴增反應玻片上，使用熒光標記復合擴增試劑盒進行LV-PCR擴增；

擴增結束后使用遺傳分析儀對LV-PCR擴增產物進行檢測獲得分型結果。

9.根據權利要求7或8所述的對混合檢材中的有核細胞進行DNA分型的方法，其特征在于，所述混合檢材為含口腔粘膜上皮細胞與表皮細胞的混合細胞的檢材，或含精子細胞和陰道上皮細胞的混合細胞的檢材。

10.根據權利要求9所述的對混合檢材中的有核細胞進行DNA分型的方法，其特征在于，所述混合檢材為含口腔粘膜上皮細胞與表皮細胞的混合細胞的檢材，所述龍膽紫的終濃度為0.2～0.3μg/μl，染色時間為3～5分鐘；所述蘇木素的終濃度為3～6μg/μl，染色時間為3～5分鐘。

11.根據權利要求10所述的對混合檢材中的有核細胞進行DNA分型的方法，所述混合檢材為含精子細胞和陰道上皮細胞的混合細胞的檢材，所述龍膽紫的終濃度為0.15～0.35μg/μl，染色時間為4～7分鐘；所述蘇木素的終濃度為4.5～7μg/μl，染色時間為4～7分鐘。

12.根據權利要求10或11所述的對混合檢材中的有核細胞進行DNA分型的方法，所述熒光標記復合擴增試劑盒為STR?Identifiler或STR?MiniFiler熒光標記復合擴增試劑盒。