[發明專利]抗氧化活性真菌提取物的制備方法

無效

• 申請號: 201010287875.6
• 申請日: 2010-09-15
• 公開（公告）號: CN102008068A
• 公開（公告）日: 2011-04-13
• 發明（設計）人: 閆培生;曹立新;高秀君;馬麗雅
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學(威海)
• 主分類號: A23L1/29
• 分類號: A23L1/29;A61K36/06;A61P39/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及食品和保健品、生物制藥和酶工程領域，具體的說是利用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、果膠酶等三種不同的酶生產真菌高抗氧化活性物質的方法。

背景技術

現代研究表明，人體內的自由基被認為是引起生物細胞氧化性損傷，進而引起腫瘤、衰老、心腦血管疾病等多種疾病的重要因素之一，在人體內的自由基中，主要是超氧陰離子自由基和羥自由基等氧自由基，超氧陰離子自由基是在生命活動的代謝過程中產生的一種重要的自由基，具有很強的氧化能力，羥自由基是最活潑的自由基，也是毒性最大的自由基，它們可以與活細胞中任何分子發生反應造成損害，且反應速度極快，被破壞的分子遍及糖類、氨基酸、蛋白質、脂、磷脂、核苷和DNA等，因此，研究和開發抗氧化劑對延緩衰老、防治疾病和開發食品與保健品等具有重大意義。

研究表明，高等真菌細胞內含有抗氧化物質，并可通過熱水、乙醇、乙酸乙酯等溶劑提取，但是，由于真菌細胞壁的存在，限制了胞內物質的提取效果。近年來，隨著酶工程的發展，研究者將酶解技術用于真菌細胞內物質的提取，因為酶可以降解細胞壁，消除了其機械阻礙，利于胞內物質的釋放，從而明顯提高提取效果。

盡管利用酶法降解真菌細胞壁可顯著提高胞內物質的提取產量，但是，酶法生產的真菌胞內提取物的抗氧化生物活性如何目前尚沒有報道。我們對多種酶類的比較研究表明，與熱水提取法相比，不同酶類不僅對真菌菌絲體胞內物質的提取率有顯著的影響，而且，對提取物的抗氧化活性也有顯著的影響，深入研究表明，提取物中的抗氧化活性物質主要是醇不溶提取物，而且，有些酶盡管使醇不溶提取物產量顯著提高，但同時卻導致獲得的醇不溶提取物的抗氧化活性也顯著降低，這顯然不利于利用酶法生產高抗氧化活性醇不溶提取物，更會導致酶法制備的醇不溶提取物的藥效降低，嚴重影響對疾病的治療，用于保健品的開發時也會顯著降低其抗氧化、延緩衰老、提高健康水平等保健作用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服上述現有技術的不足，提供一種抗氧化活性真菌提取物的制備方法。

本發明解決上述技術問題采用的技術方案是：一種抗氧化活性真菌提取物的制備方法。其包括如下步驟：

(1)按1％(干重比)的比例向菌絲體中加入木瓜蛋白酶、或中性蛋白酶、或果膠酶；

(2)以重量比1∶10的比例加入蒸餾水，勻漿；

(3)在pH4.5-7.5和溫度45-50℃下酶解2小時；

(4)酶解結束后，將酶解混合液加熱升溫到100℃滅活酶，并維持2小時以便釋放提取其胞內物質；

(5)將提取液于5000轉/分鐘下離心20分鐘，收集上清液；

(6)在50℃溫度下，減壓濃縮上清液至原體積的1/4。

(7)向濃縮液中加入3倍體積的食用乙醇，于4℃下沉淀24小時；

(8)5000轉/分鐘下離心20分鐘，收集沉淀。

(9)將沉淀經真空冷凍干燥后，即獲得抗氧化活性的醇不溶提取物凍干粉末。

本發明方法與熱水提取法制備真菌醇不溶提取物相比，不僅一定程度上提高了醇不溶提取物的產量，而且更重要的是顯著提高了醇不溶提取物的抗氧化活性，經本發明可使不同種類的真菌的菌絲體醇不溶提取物產量提高10.0-74.1％，總抗氧化活性提高9.8-78.4％，超氧陰離子自由基清除活性提高48.5-192.2％；與熱水提取法相比，本發明方法也顯著減少了操作時間和降低了能量消耗。本發明是一種簡便、高產、低耗制備高抗氧化活性真菌醇不溶提取物的方法。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明做進一步說明。

實施例1

一種木瓜蛋白酶高產制備高抗氧化活性菌絲體醇不溶提取物的方法，其首先向1000克發酵菌絲體中，按重量比1％的比例加入木瓜蛋白酶10克，并以重量比1∶10的比例加入蒸餾水后，勻漿，在50℃溫度和pH7.0下進行酶解2h；酶解結束后，將酶解混合液加熱升溫到100℃滅活酶，并維持2小時提取其胞內物質，將提取液在5000rpm離心20min，收集上清液，向上清液中加3倍體積的食用乙醇后于4℃下沉淀24小時，5000rpm離心20min，收集沉淀，即為醇不溶提取物，將醇不溶提取物經真空冷凍干燥后，即獲得抗氧化活性的醇不溶提取物凍干粉末。經測定本發明制備的醇不溶提取物產量為9.73克，比對照熱水法產量提高74.1％，經試劑盒法測定，醇不溶提取物的總抗氧化活性比對照熱水法提高了20.0％，超氧陰離子自由基清除活性比對照熱水法提高了192.2％。

實施例2