[發明專利]一種犢牛體外胚胎生產的方法

無效

• 申請號: 201010287746.7
• 申請日: 2010-09-20
• 公開（公告）號: CN101962627A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發明（設計）人: 薛建華;呂小青;朱玉林;宣柏華;梁鴻斌;李艷華;曹福存;吳勝權;王彥平;王海浪
• 申請（專利權）人: 北京奶牛中心
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075;C12N5/073;A61D19/02
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

1.一種犢牛激素超排的方法，其特征在于，選用9-12周齡犢牛，經陰道埋植CIDR，分別在第5d和第6d注射FSH。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在第5d注射FSH，注射劑量為40mg-45mg，間隔12h再注射30mg-35mg，第6d注射FSH，劑量為30mg-35mg，間隔12h再注射同等劑量的FSH。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，在第5d間隔12h注射FSH，注射劑量為40mg和30mg，第6d注射劑量為30mg/12h。

4.一種犢牛體外胚胎生產的方法，包括步驟：

1)犢牛激素超排：選用9-12周齡犢牛，經陰道埋植CIDR，分別在第5d和第6d注射FSH，第7d采卵；

2)犢牛卵母細胞體外成熟：將步驟1)中得到的卵母細胞加入到成熟培養液中，在38.5℃，5％CO₂，飽和濕度的條件下培養22-24h；

3)將得到的成熟卵母細胞進行體外受精；

4)受精卵在體外發育成胚胎。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟1)中在第5d間隔12h注射FSH，注射劑量為40mg-45mg和30mg-35mg，第6d間隔12h注射FSH，劑量為30mg-35mg。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟2)中成熟培養液的成分為：TCM199+10mM?HEPES+5％FBS+0.5μg/ml?FSH+5μg/ml?LH+1μg/ml?E₂+27.5μg/ml丙酮酸鈉+100IU/ml青鏈霉素+100μM半胱胺。

7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟3)中受精時間為8h。

8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟4)包括：在38.5℃，5％CO₂，飽和濕度的條件下，將受精卵置于前期發育培養液中培養48h，卵裂后移入后期發育培養液中繼續培養，間隔2d半量換液一次，胚胎發育第7d、8d統計囊胚數量；

其中，所述CR?I?aa液為：114.7mM?NaCl+3.1mM?KCl+26.2mMNaHCO₃+10μg/ml苯酚紅+1mM谷氨酸+0.4mM丙酮酸鈉+5.5mM半乳酸鈣+2％EAA+1％NEAA+141mM?MgCl₂6H₂O+100IU/ml青鏈霉素；所述前期發育培養液為：CR?I?aa液+6mg/ml?BSA，后期發育培養液的成分為：CR?I?aa液+10％FBS。