[發明專利]水貂生長激素釋放激素cDNA及其應用

無效

• 申請號: 201010286366.1
• 申請日: 2010-09-17
• 公開（公告）號: CN102399283A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 王吉貴;劉維全;劉芃芃;齊順章
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K14/60
• 分類號: C07K14/60;C12N15/16;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;A61K48/00;A61K38/25;A61P43/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

技術領域

本發明涉及克隆獲得的水貂生長激素釋放激素cDNA及其應用。

背景技術

水貂是一種經濟價值很高的毛皮獸，其生長主要受垂體產生和釋放的生長激素來控制，在達到體成熟后，生長激素的產生和釋放隨之減少。而生長激素又受到動物本身下丘腦產生的生長激素釋放激素和生長激素釋放抑制激素的雙重控制。其中生長激素釋放激素促進垂體產生和釋放生長激素，而生長激素釋放抑制激素則抑制生長激素的產生。二者協調作用，共同維持水貂的生長速度。生長激素釋放激素在丘腦下部的弓狀核和腹內側核產生，合成后即經軸突運輸并分泌到正中隆起，由此經垂體門脈系統到達腺垂體。然后刺激腺垂體產生生長激素。以人的生長激素釋放激素為例加以說明：人生長激素釋放激素的前體是由108個氨基酸殘基組成的多肽鏈，其中N端前20個氨基酸殘基為信號肽序列，在穿膜時被切除，經過再加工，成熟的人生長激素釋放激素含有44個氨基酸殘基，44肽的順序為：NH₂-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-COOH。該成熟蛋白經垂體門脈系統到達腺垂體，并與分泌GH的嗜酸性細胞的膜上GHRH受體(GHRH-RP)結合，GHRH與受體結合后先激活一種對霍亂毒素敏感的Gs蛋白，進而Gs激活膜上的腺苷酸環化酶(AC)，使ATP轉變為cAMP，導致cAMP水平上升。而cAMP水平的上升又會促進cAMP依賴性蛋白酶激酶A的調節亞基構象的改變并活化，促進相關蛋白的磷酸化，進而影響到細胞的活性。cAMP引起的GH分泌有Ca²⁺依賴性，當GHRH作用到生長激素分泌細胞時，60秒內會使Ca²⁺的濃度提高，從而促進GH分泌。有證據表明Ca²⁺的阻斷可以終止cAMP對GH的釋放作用。由此可見GHRH對GH的分泌是通過cAMP與Ca²⁺介導的，通過該過程調節GH的合成與釋放^[1]。由于GHRH呈脈沖式釋放，相應的垂體的GH也呈脈沖式波動。

生長激素釋放激素(GHRH)一般為44個氨基酸的多肽，完整的生物學活性決定于氨基酸的第1-29個氨基酸，半衰期7-50分鐘，可見其作用時間之短。不同動物的生長激素釋放激素分子大小略有不同，豬、牛、狗、人和綿羊等幾種動物的GHRH蛋白發揮作用的活性形式是44個氨基酸殘基的小肽。它們的同源性很高。如下所示：

狗：YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSRQQGERNREQGAKVRL

豬：YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSRQQGERNQEQGARVRL

牛：YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMNRQQGERNQEQGAKVRL

人：YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSRQQGESNQERGARARL

綿羊：YADAIFTNSYRKILGQLSARKLLQDIMNRQQGERNQEQGAKVRL

相對應的不同動物生長激素釋放激素的cDNA核苷酸序列的大小也有所不同，人的生長激素釋放激素最早在1974被分離純化并鑒定出來^[2]。目前很多動物包括人的生長激素釋放激素cDNA基因已經被克隆并公之于眾。人的cDNA序列為327個核苷酸，小鼠312，大鼠315，狗、牛、豬均為321個。多數序列都進行了專利保護。如：

中國專利02100065.4保護了羊的生長激素釋放激素的cDNA基因及其表達產物的應用。

00813372.7(超級活性的豬生長激素釋放激素類似物)保護了優化了的豬GHRH的核苷酸和氨基酸序列。

03822291.4(GHRH類似物)保護了優化了的人GHRH的核苷酸序列和氨基酸。

200610017214.5保護了促進仔豬生長、提高仔豬免疫力的GHRH藥物及制備方法。

200510061609.0保護了一種能促進人體長高的GHRH藥物及其制劑。

200710068659.0保護了鹿茸促生長釋放因子(DEER?GHRF)提取及其制備方法。