[發(fā)明專利]飼料中伏馬毒素的檢測方法

無效

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• 申請日: 2010-09-19
• 公開（公告）號: CN102043044A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發(fā)明（設計）人: 張福生
• 申請（專利權）人: 張福生
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明是一種飼料中伏馬毒素的檢測方法，屬飼料加工業(yè)。

背景技術

伏馬毒素主要是由串珠鐮刀菌在一定溫度和濕度條件下繁殖所產生的次級代謝產物。直到1988年，南非和美國的研究人員才首次從霉變的玉米中分離出伏馬毒素。糧食在加工、貯存、運輸過程中易受上述兩種真菌污染，特別是當溫度適宜時，更利于其生長繁殖，從而產生出一類結構性質相似的毒素，其中含有伏馬毒素B1、B2和B3，60％以上為伏馬毒素B1，其毒性也最強。因此，伏馬毒素可以通過糧食加工、飼料生產等過程對畜牧業(yè)乃至人類健康產生較嚴重的危害。伏馬毒素純品為白色針狀結晶，為一類相關的極性、水溶性代謝產物，為多氫醇和丙三羧酸的雙酯化合物，對熱很穩(wěn)定，不易被蒸煮破壞，在多數糧食加工處理過程均比較穩(wěn)定。

發(fā)明內容

一、伏馬毒素對動物及人類的危害

1.馬大腦白質軟化癥

這是一種馬的神經失調疾病。根據南非研究人員的試驗結果，每天以0.125mg/kg體重的水平給馬進行皮下注射，大約7天后馬開始發(fā)瘋、發(fā)狂，沖撞欄桿而死。解剖發(fā)現馬的大腦呈現白質軟化癥狀。1989年，美國有很多州陸續(xù)發(fā)生豬肺水腫、胸積水以及馬大腦白質軟化癥等動物疾病的暴發(fā)和流行，并且這些疾病均集中發(fā)生在位于美國中西部地區(qū)玉米種植帶上的各個州中，并且通過這些州輸出的玉米飼料又擴大了疾病流行的地區(qū)和延長了流行時間，給當地的農業(yè)和畜牧業(yè)造成了巨大的損失。后經美國科學家研究證明，這一切都是因為當地生產的玉米被伏馬毒素污染所致。這種病在南非、阿根廷、巴西均有發(fā)現。

2.豬肺水腫

美國和南非的科學家研究表明，每天伏馬毒素的攝取量在0.4mg/kg體重以上均可引發(fā)豬的肺水腫，還可造成豬生殖系統(tǒng)的紊亂，如早產、流產、死胎和發(fā)情周期異常等。這種病在美國及其他國家都有發(fā)現，并且容易對當地畜牧業(yè)造成較大的影響。

3.小鼠肝癌

南非科研人員對小鼠進行了伏馬毒素的毒理試驗，試驗結果表明，以50mg/kg體重水平飼養(yǎng)小鼠，18～26個月后，發(fā)現肝腫瘤患病率急劇上升，這是首次發(fā)現伏馬毒素引發(fā)肝癌的證據。對大鼠進行了伏馬毒素毒理試驗，結果相同。

4.人類食道癌

南非科學家就對食道癌發(fā)病率高和低的地區(qū)進行過調查，結果發(fā)現食道癌高發(fā)地區(qū)的主食玉米受伏馬毒素的污染情況比低發(fā)區(qū)嚴重，食道癌發(fā)病率與伏馬毒素污染呈正相關，進一步的動物試驗也得到了相同的結果。中國學者和日本學者對食道癌高發(fā)區(qū)的河南省林縣進行了一次調查，發(fā)現該地區(qū)主食玉米中伏馬毒素水平高達30～50mg/kg，發(fā)霉玉米中伏馬毒素最高值達118.4mg/kg。目前伏馬毒素引發(fā)食道癌的機理還不清楚，需進一步確證和研究。

二、伏馬毒素的發(fā)生情況

伏馬毒素尤其是FB1對飼料污染的情況在世界范圍內普遍存在，且對糧食作物的污染情況較嚴重，其污染的飼料主要為以玉米為原料的飼料。玉米中伏馬毒素含量受許多環(huán)境因素的影響，如收獲前和收獲期間的溫度、濕度、干旱情況和玉米中高水平的伏馬毒素與前期干熱后期一段高濕天氣有關。玉米中伏馬毒素含量也受貯存條件的影響，如收獲的玉米在貯存期間水分在18％～23％時，最適宜產伏馬毒素的串珠鐮刀菌的生產和繁殖，導致玉米中伏馬毒素含量的增加。

2001年美國食品與藥物管理局(FDA)發(fā)布了供人類食用的玉米和玉米產品伏馬毒素最高限量指導性公告，規(guī)定人類食用玉米中伏馬毒素最高限量為2mg/kg；同時，FDA的畜牧醫(yī)學中心(CVM)也發(fā)布了動物飼料中伏馬毒素的最高限量指導性公告，規(guī)定其限量范圍為1～50mg/kg。

具體實施方式

伏馬毒素的檢測先后使用過薄層色譜法、氣相色譜法、酶聯免疫法(ELISA)、高效液相色譜法(HPLC)等，目前研究和應用得最多的是利用免疫親和柱凈化后的熒光儀檢測法和HPLC法。

免疫親和柱-熒光儀檢測法的原理為：將飼料樣品與提取液混合、均勻、過濾，然后將濾液通過鍵合有伏馬毒素特殊抗體的分離柱。此時，伏馬毒素鍵合在分離柱中的抗體上。用蒸餾水將免疫親和柱上的雜質除去。用淋洗液通過分離柱，將伏馬毒素從抗體上分離下來。最后，將淋洗液注入熒光計進行測定。檢測范圍為0～10mg/kg，檢測限為0.25mg/kg，檢測時間約為15分鐘，回收率大于80％，變異系數小于15％。免疫親和柱-HPLC法的原理為：經甲醇-水(4∶1)提取，提取液通過免疫親和柱凈化，凈化液經柱前衍生、色譜柱分離、熒光檢測器檢測、外標法定量。對玉米原料的檢測回收率B1為82.3％～88.7％，B2為74.9％～81.6％，變異系數B1為4.9％～6.3％，B2為5.8％～7.2％，檢測限B1可達0.020mg/kg，B2可達0.040mg/kg。