[發明專利]人表皮源性間充質干細胞樣多能細胞及其制備方法

有效

• 申請號: 201010282388.0
• 申請日: 2010-09-13
• 公開（公告）號: CN101948803A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 黃冰;葛堅
• 申請（專利權）人: 中山大學中山眼科中心
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 莫瑤江

1.一種細胞培養基，其特征在于：在葡萄糖含量為0.5～5g/L的DMEM培養基中添加胎牛血清、hbFGF、hSCF、非必須氨基酸、L-谷氨酰胺、慶大霉素，并使上述各種添加成分的終濃度如下：胎牛血清：體積分數為10～25％、1～40ng?hbFGF/mL、0.1～20ng?hSCF/mL、0.1～2mL?100X非必須氨基酸/100mL、0.1～2mL含質量分數為3％L-谷氨酰胺的PBS溶液/100mL和1000～8000U慶大霉素/100mL。

2.一種人表皮源性間充質干細胞樣多能細胞的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

a)將人表皮細胞在權利要求1所述的細胞培養基中培養；

b)然后用消化液消化，祛除未消化下來的人表皮細胞，收集消化下來的間充質干細胞樣細胞，即為人表皮源性間充質干細胞樣多能細胞。

3.根據權利要求2所述的人表皮源性間充質干細胞樣多能細胞的制備方法，其特征在于，所述的步驟a)的人表皮細胞的獲取方法為：取包皮或其他皮膚組織，用II型組織酶消化獲得表皮，將表皮剪碎，再用胰蛋白酶進一步消化，獲得人表皮細胞。

4.根據權利要求2所述的人表皮源性間充質干細胞樣多能細胞的制備方法，其特征在于，所述的步驟a)中人表皮細胞在權利要求1所述的細胞培養基中培養，培養條件為：36±1℃、5±1％CO₂、90～100％濕度，每隔2-3天更換細胞培養基。

5.根據權利要求2所述的人表皮源性間充質干細胞樣多能細胞的制備方法，其特征在于，所述的步驟b)的具體步驟為當細胞生長至60～90％融合度時，用質量分數為0.25％的胰蛋白酶與質量分數為0.02％的EDTA溶液按照體積比1∶1混合而形成的消化液消化，祛除未消化下來的人表皮細胞，收集消化下來的間充質干細胞樣細胞，即為人表皮源性間充質干細胞樣多能細胞。

6.根據權利要求2所述的人表皮源性間充質干細胞樣多能細胞的制備方法制備的人表皮源性間充質干細胞樣多能細胞。

7.一種將權利要求6所述的人表皮源性間充質干細胞樣多能細胞進行傳代培養的方法，其特征在于，傳代培養的條件為，以權利要求1所述的細胞培養基作為傳代培養基，于36±1℃、5±1％CO₂、90～100％濕度下進行傳代培養，而獲得人表皮源性間充質干細胞樣多能細胞株。