[發明專利]一種雞肉質相關基因IGFBP-1及其應用

有效

• 申請號: 201010281673.0
• 申請日: 2010-12-09
• 公開（公告）號: CN101962646A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發明（設計）人: 張細權;彭霞;聶慶華;雷明明
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/68
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

技術領域

本發明涉及基因工程和遺傳育種領域，具體涉及一種雞肉質相關基因IGFBP-1及其應用。?

背景技術

我國具有豐富的優質肉雞資源，然而同一品種的肉雞在不同個體間也有很明顯的差異。將分子標記的現代育種技術應用于優質肉雞的選育將會有效提高選種效率。?

肌肉的發生受多種因素影響，包括成肌細胞的發生、遷移、增生、分化、肌管形成，在這一系列的過程中，多個基因家族發揮重要的生物學作用，其中包括胰島素樣生長因子（Insulin-like?growth?factor，IGF）系統。?

IGF系統包括IGF-1、IGF-2，IGFBP-1至IGFBP-7，以及一系列的IGFBP相關基因，在肌細胞的發生、分化、肌纖維的形成過程中發揮重要的調節作用。IGFBP生物學發揮最主要的方式是通過與IGF結合，阻礙IGF與其受體的結合，從而阻礙IGF生物學功能的發揮，因此與IGF作用相反。?

迄今為止，尚無有關雞IGFBP-1基因作為雞肉質性狀的分子標記。?

發明內容

本發明的目的在于根據現有的雞肉質品種篩選中存在的不足，提供一種雞肉質相關基因IGFBP-1。?

本發明還有一個目的在于提供上述雞肉質相關基因IGFBP-1的應用。?

本發明上述目的通過以下技術方案予以實現：?

一種雞肉質相關基因IGFBP-1，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，該序列中第286bp處有1個ATA三堿基的插入缺失突變。

其中用于擴增所述基因IGFBP-1和檢測序列表SEQ?NO:1的第286處ATA/-堿基摻入缺失的正反向引物的DNA序列如SEQ?ID?NO:2~3所示。?

本發明雞肉質相關基因IGFBP-1的應用具體步驟如下：?

（1）對待選育雞進行靜脈采血提取總DNA；

（2）根據報道的雞IGFPB-1基因序列（Ensembl:ENSGALG00000012437）利用生物學引物設計軟件Primer5.0設計軟件，經Oligo軟件檢測，確定引物，引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成，序列由SEQ?ID?NO:2~3所示；

（3）將擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，根據產物大小判定結果。

作為一種優選方案，步驟（2）中所述PCR反應擴增程序為：?

作為一種優選方案，步驟（3）中用2.0%含EB瓊脂糖凝膠電泳對PCR擴增產品進行檢測，所述電泳條件為電壓100V，時間為20min，在凝膠成像系統中觀察條帶，并進行回收和純化，并測序，發現存在?位插入缺失變異。

取16?μL?PCR擴增產物，加入10U?SspⅠ限制性內切酶和2?μL?10×酶切緩沖液，加水至20μL；?

反應完成后，用2.5%瓊脂糖凝膠電泳，電泳條件為電壓100V，時間為30min，在凝膠成像系統中觀察條帶，根據產物的大小判定結果。

使用PCR擴增得到含有ATA插入缺失變異的IGFBP-1基因626bp，因為插入型個體含有一個SspⅠ-RFLP多態性。?

與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：?

本標記為雞肉質性狀的選育提供了一種新的分子標記。實驗證明IGFBP-1基因對雞的肌肉剪切力和肌纖維橫截面積的有一定的影響，可以做為候選基因或雞肉質性能的的遺傳標記。

附圖說明

圖1是本發明的技術流程圖；?

圖2是用雞血液總DNA擴增IGFBP-1基因626bp的片段，瓊脂糖檢測電泳圖。瓊脂糖凝膠濃度為2.0%。圖中泳道從左至又分別為DNA分子量標記（50-2000bp）、樣本1、楊本2、樣本3；

圖3為IGFBP-1基因626bp測序結果圖，上面為ATA插入型，下面為缺失型；

圖4為IGFBP-1基因PCR產物經過SspⅠ酶切，基因分型電泳圖。圖中泳道從左到右分別為DNA分子量標記（50-2000bp）、DD基因型個體、II基因型個體及ID基因型個體。

具體實施方式

以下結合實施例來進一步解釋本發明，但實施例并不對本發明做任何形式的限定。

實施例1?

1、雞血樣的采集和DNA的提取：