[發明專利]一種檢測雞玫瑰冠性狀的方法

有效

• 申請號: 201010280656.5
• 申請日: 2010-09-13
• 公開（公告）號: CN102041310A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發明（設計）人: 胡曉湘;馮春剛;劉冉冉;顧曉榮;王彥強;李寧
• 申請（專利權）人: 李寧;胡曉湘
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

技術領域

本發明涉及使用分子生物學手段，對雞冠性狀進行分子標記檢測的方法。

背景技術

隨著畜牧業的發展，外貌特征在雞的育種和保種中占據了重要地位，分子標記也在育種和保種中起到了重要作用。但是，對于控制外貌特征的分子標記的研究仍然較少，僅有少量的外貌特征能夠通過分子標記進行輔助選擇育種。

雞冠為皮膚衍生物，位于頭部，不同品種有不同冠形，冠形為品種特征之一，包括單冠、玫瑰冠、豆冠、肉墊冠、草莓冠、杯狀冠、羽毛冠等7種，冠的顏色大多為紅色，色澤鮮艷、細致、豐滿、滋潤是健康的征狀。1905年，Bateson和Punnett第一次在動物中利用玫瑰冠和豆冠闡明了位點互作的現象(Bateson?W.，Punnett?R.C.Asuggestion?as?to?the?nature?of?the″walnut″comb?in?fowls.Proceedings?ofthe?Cambridge?Philosophical?Society?13：165-168，1905)，利用玫瑰冠位點開展的遺傳學研究在遺傳學的發展歷史中起到了重要作用。

玫瑰冠表型相對于單冠表型是一種單位點控制的顯性性狀，因而在保種和育種的過程中，根據表型無法準確區分顯性純合子和雜合子個體，造成選育效率低下。隨著分子數量遺傳理論的發展，需找到影響玫瑰冠性狀的分子標記，通過標記輔助選擇，可以迅速準確地鑒定候選個體的基因型，從根本上解決這一保種和育種難題。

DNA分子標記是以個體間遺傳物質中的核苷酸序列變異為基礎的遺傳標記，是DNA水平遺傳多態性的接反映。在雞基因組中分布有大量的分子標記，攜帶巨大的遺傳信息量，目前已經有多個重要性狀得到了定位，可以利用相關的分子標記進行分子標記輔助選擇育種，對育種起到了巨大的促進作用。

擴增片段長度多態性是指用聚合酶鏈式反應(PCR)技術進行體外擴增DNA時出現的片段長度多態性現象，是一種十分理想、有效的分子標記。

CAU資源家系是由中國農業大學李寧教授課題組1998年建立的用于研究定位影響雞重要經濟性狀QTL、尋找克隆主效基因的實驗群體，親本為法國明星肉雞和泰和絲羽烏骨雞(鄧學梅，李俊，李寧，吳常信.(2001).基于F-2群體的雞重要生長性狀遺傳分析.遺傳學報28，801-807)。在CAU資源家系中記錄了F0、F1和F2代個體的雞冠形狀，根據連鎖分析定位了影響雞玫瑰冠性狀的基因位點，為進一步的研究打下了基礎。通過分析該區域的雞卷曲螺旋結構域108(Coiled-Coil?Domain?Containing?108，CCDC108)基因序列，分離得到了影響雞玫瑰冠性狀的基因和序列變異。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用雞卷曲螺旋結構域108(Coiled-Coil?Domain?Containing?108，CCDC108)基因的擴增片段長度多態檢測雞玫瑰冠性狀的方法。

為達到上述目的，本發明的技術方案首先提供用于檢測雞玫瑰冠性狀的引物對，其具有如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2和SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列。

利用此引物對的擴增產物，檢測待測雞的CCDC108基因內含子3中擴增片段為294bp還是418bp。

上述引物對還可應用于制備檢測雞玫瑰冠性狀的試劑盒。只需含有必需的PCR試劑和引物對即可，也可同時含有提取待測雞的基因組DNA的試劑。

本發明進一步提供一種檢測雞玫瑰冠性狀的方法，包括如下步驟：分別以每只待測雞的基因組DNA為模板，用SEQ?ID?NO.1、SEQID?NO.2和SEQ?ID?NO.3所示的DNA組成的引物對進行PCR擴增，如果擴增片段為294bp(如SEQ?ID?NO.4所示)，待測雞的基因型為SS；如果擴增片段為418bp(如SEQ?ID?NO.5所示)，待測雞的基因型為RR；如果擴增片段為294bp和418bp，待測雞的基因型為RS；述SS基因型雞為單冠純合子，RR基因型雞為玫瑰冠純合子，RS基因型雞為玫瑰冠雜合子。上述檢測方法可以為常規的PCR-瓊脂糖檢測方法。

上述的方法，引物對或試劑盒可應用于雞的育種。