[發明專利]一種對水產動物有免疫增強活性的CpG寡聚核苷酸及其制備和應用

有效

• 申請號: 201010280221.0
• 申請日: 2010-09-10
• 公開（公告）號: CN102399784A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 邱麗梅;孫瑞;岳峰;張瑩;王玲玲;張峘;宋林生
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C12N15/117
• 分類號: C12N15/117;C12N15/10;A23K1/16
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 許宗富;周秀梅

1.一種對水產動物有免疫增強活性的CpG寡聚核苷酸，其特征在于：對水產動物有免疫增強活性的CpG寡聚核苷酸序列具有序列表SEQ?ID?N0.1所示的堿基序列。

2.一種按權利要求1所述的對水產動物有免疫增強活性的CpG寡聚核苷酸的制備方法，其特征在于：將人工設計合成的CpG寡聚核苷酸序列與pUC57質粒相連，而后轉化入大腸桿菌DH5α菌株中，37℃，200-220rpm震蕩培養4-6h；將上述菌液按1∶100的體積比接種與發酵培養基中，發酵培養7-9h；收集富含CpG寡聚核苷酸的發酵培養物于STET緩沖液中懸浮菌體并震蕩攪拌，而后在每毫升菌體重懸液中加入80-100μg攪拌均勻于36.5-37.5℃中水浴20-30min，隨后將裂解液于沸水浴中加熱10-15min，沸水加熱后冷卻至室溫，離心取上清；將上清加入到上清液0.6倍體積的預冷的異丙醇中，室溫下沉降離心沉淀，即得具有序列表SEQ?ID?NO.1所示的堿基序列的寡聚核苷酸CpG?ODNs。

3.按權利要求2所述的對水產動物有免疫增強活性的CpG寡聚核苷酸的制備方法，其特征在于：所述發酵培養基的組成成分：5g/L胰化蛋白胨，5g/L酵母提取物，4g/L?KH₂PO₄，4g/L?K₂HPO₄，7g/L?Na₂HPO₄，1.2g/L(NH₄)₂SO₄，0.2g/L?NH₄Cl，加氨芐青霉素至50μg/ml；發酵過程中的補加培養基成分：71g/L酵母提取物，71g/L蛋白胨，170g/L甘油，5.7g/L?MgSO₄；

所述STET緩沖液成分：80g/L蔗糖，2.0％(φ)TritonX-100，100mmol/L?EDTA，50mmol/L?Tris-Cl，pH8.5。

4.一種按權利要求1所述的水產動物有免疫增強活性的CpG寡聚核苷酸的應用，其特征在于：所述序列表SEQ?ID?NO.1所示的堿基序列CpG寡聚核苷酸可作為水產養殖飼料的添加劑或免疫增強劑。

5.按權利要求4所述的具有免疫增強活性的CpG寡聚核苷酸的應用，其特征在于：將上述序列表SEQ?ID?NO.1所示的堿基序列CpG寡聚核苷酸加入到飼料中，每千克飼料中添加10-100mg上述序列表SEQ?ID?NO.1所示的堿基序列的CpG?ODNs寡聚核苷酸。