[發(fā)明專利]一種測定制漿黑液還原糖含量的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010279985.8
• 申請日: 2010-09-11
• 公開（公告）號: CN101963578A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魯杰;楊瑞豐;卜令習(xí)
• 申請（專利權(quán)）人: 大連工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28;G01N1/34;G01J3/427
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責(zé)任公司 21212
• 代理人: 畢進(jìn)

1.一種測定制漿黑液還原糖含量的方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行操作：

第一步、3，5-二硝基水楊酸溶液配制，稱取6.3g?3，5-二硝基水楊酸和262ml2mol·l^-1氫氧化鈉溶液加入酒石酸鉀鈉熱溶液中，再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸鈉攪拌溶解，冷卻后定容至1000ml，儲存于棕色瓶，放置72h后使用；

第二步、木素的提取，取一定量的堿法蒸煮黑液，用稀硫酸調(diào)節(jié)溶液至pH6，離心分離，取上層液體，再用稀硫酸調(diào)至pH?3，再離心分離，取出沉淀物，并用稀硫酸洗滌，然后離心，重復(fù)操作2～3次，取離心后沉淀物置于80℃真空干燥箱烘干，用研缽研碎，制得粗木素；

第三步、木素的提純，將粗木素溶于140ml吡啶-醋酸-水體系中，用180ml氯仿萃取，靜置4h分層后搖蕩，再次分層后，分出下層溶有木素的有機層；上層溶液中加入150ml氯仿再次萃取，搖蕩后靜置，待分層后分離出下層的有機層；合并兩次有機層萃取液，在旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器中濃縮至95～105ml，移至1000ml無水乙醚中，攪拌使析出沉淀，將沉淀用乙醚洗滌，至無吡啶味為止，置于P₂O₅的真空干燥器中干燥，得到淺灰色精制木素；

第四步、葡萄糖及木素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制，定量稱取分析純葡萄糖，用pH?4.8的醋酸-醋酸鈉緩沖液配制成1g/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液；準(zhǔn)確稱取精制木素，配制成0.05g/ml木素的3，5-二硝基水楊酸溶液，然后用去離子水定容，得0.01g/ml木素標(biāo)準(zhǔn)溶液；

第五步、放大系數(shù)的確定，通過測定不同木素含量3，5-二硝基水楊酸溶液在波長520nm和570nm處吸光度值，得到木素標(biāo)準(zhǔn)液用量與兩波長處吸光度關(guān)系曲線，其線性關(guān)系方程分別為A_520木素＝ε_520木素c_木素+N_1木素，A_570木素＝ε_570木素c_木素+N_2木素；通過測定不同葡萄糖含量3，5-二硝基水楊酸溶液在波長520nm和570nm處吸光度值，得到葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液用量與兩波長處吸光度關(guān)系曲線圖，其線性方程分別為A_520葡萄糖＝ε_520葡萄糖c_葡萄糖+N_1葡萄糖，A_570葡萄糖＝ε_570葡萄糖c_葡萄糖+N_2葡萄糖，得到差示信號S₀＝K₂(A_520木素+A_520葡萄糖)-K₁(A_570木素+A_570葡萄糖)＝(ε_570木素ε_520葡萄糖-ε_570葡萄糖ε_520木素)c_葡萄糖+N₀；

第六步、雙波長測定黑液中還原糖含量計算公式的確定，通過計算得到各編號葡萄糖溶液差示信號值S₁，作圖得到差示信號S₁與葡萄糖濃度關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，由標(biāo)準(zhǔn)曲線線性計算公式可以近似得到差示信號與葡萄糖含量關(guān)系式：S₁＝ε₁c_葡萄糖+N₁，測定一組即含葡萄糖又含木素的DNS溶液520nm和570nm處吸光度值，并計算出各編號溶液差示信號值S₂，得到混合液差示信號與葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液關(guān)系曲線，得計算公式S₂＝ε₂c_葡萄糖+N₂，取校正系數(shù)k＝ε₂/ε₁，經(jīng)校正后差示信號與葡萄糖關(guān)系式為S＝k·S₂＝εc_葡萄糖+N，則可計算得到還原糖含量與差示信號間計算公式；

第七步、黑液中還原糖含量測定，將黑液調(diào)pH值至5，加入適量pH4.8醋酸-醋酸鈉緩沖液，離心去除其中不溶物，取離心清液，稀釋適當(dāng)倍數(shù)，取其中5ml于預(yù)先加入5ml?pH4.8醋酸-醋酸鈉緩沖液，3ml3，5-二硝基水楊酸溶液的比色管中，煮沸5min后迅速冷卻后用去離子水定容至25ml。以3ml3，5-二硝基水楊酸溶液定容至25ml溶液為參比，測定溶液520nm及570nm處吸光度值，根據(jù)計算公式得到黑液中還原糖含量；

其中，酒石酸鉀鈉溶液是由182g酒石酸鉀鈉溶于500ml去離子水配制而成的；吡啶-醋酸-水的體系組成為吡啶∶醋酸∶水的體積比為9∶1∶4；N為常數(shù)，分別為N、N₀、N₁、N₂、N_1木素、N_2木素、N_1葡萄糖、N_2葡萄糖。