[發(fā)明專利]一種O型口蹄疫病毒VP2抗原表位的分子模擬肽及其用途

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010278582.1
• 申請(qǐng)日: 2010-09-10
• 公開（公告）號(hào): CN101948510A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫樹漢;郭瀛軍;章意亮;周奇;張毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K7/08
• 分類號(hào): C07K7/08;A61K39/135;A61P31/14
• 代理公司: 上海德昭知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31204
• 代理人: 丁振英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及動(dòng)物傳染病預(yù)防和疫苗研制領(lǐng)域，具體涉及一種能模擬O型口蹄疫病毒VP2抗原表位的短肽，以及該短肽在制備免疫原、豬O型口蹄疫疫苗上的應(yīng)用。

背景技術(shù)

口蹄疫(Foot?and?Mouth?Disease，F(xiàn)MD)是偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。該病傳播途徑多、傳播速度快，曾多次在世界范圍內(nèi)發(fā)生大流行。雖然該病的死亡率不高(幼畜除外)，但造成動(dòng)物生產(chǎn)性能下降，撲殺動(dòng)物花費(fèi)大量的人力、物力和財(cái)力，影響國(guó)際貿(mào)易，經(jīng)濟(jì)損失慘重。如1997我國(guó)臺(tái)灣、2000年日本和韓國(guó)、2001年英國(guó)暴發(fā)的口蹄疫可以說(shuō)給這些地區(qū)或國(guó)家畜牧經(jīng)濟(jì)造成了致命的打擊。為此，世界各國(guó)非常重視口蹄疫防控措施的研究。

該病的致病病原體為口蹄疫病毒(Foot?and?Mouth?Disease?Virus，F(xiàn)MDV)，屬于小RNA病毒科，口蹄疫病毒屬，該病毒有七個(gè)血清型，各型之間無(wú)交叉保護(hù)反應(yīng)。疫苗接種是特異性預(yù)防口蹄疫的可靠和有效手段。雖然目前使用的口蹄疫病毒弱毒疫苗和滅活疫苗等常規(guī)疫苗具有良好的免疫原性，在預(yù)防和控制口蹄疫病毒的過程中發(fā)揮著重要作用，但由于病毒毒力返強(qiáng)、病毒滅活不徹底、活病毒在工廠制備時(shí)逃逸等不安全因素，世界上一些地區(qū)口蹄疫的暴發(fā)似乎與滅活疫苗中殘存的活病毒有關(guān)，促使人們尋求一種更加安全有效的口蹄疫疫苗。

噬菌體表面展示技術(shù)是上世紀(jì)九十年代初發(fā)展起來(lái)的一種新的基因操作技術(shù)，它使表達(dá)的外源肽與噬菌體表面特定蛋白融合并展示于其表面，被展示的多肽可以保持相對(duì)獨(dú)立的空間結(jié)構(gòu)和生物特性，借以研究多肽的性質(zhì)、相互識(shí)別和作用，并據(jù)此從巨大的展示肽庫(kù)中選擇出具有特定功能的多肽(噬菌體展示肽庫(kù)技術(shù)及其應(yīng)用研究現(xiàn)狀，中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2007，2(2)：152-154)。

由于抗原在體內(nèi)誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的過程中起決定作用的結(jié)構(gòu)是抗原表位，而通常表位的長(zhǎng)度不過幾個(gè)到幾十個(gè)氨基酸，因此以抗原表位為免疫原的疫苗設(shè)計(jì)是基因工程疫苗的一種重要形式。多肽表位使靶分子的抗原性與毒性作用分離，疫苗載體表面僅展示抗原表位肽段，不存在完整的靶分子結(jié)構(gòu)，也不具有完整的靶分子功能。但是，傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)抗原表位分析方法主要是通過化學(xué)或生物學(xué)方法處理抗原分子以獲得多肽碎片，再利用單克隆抗體篩選能與之起陽(yáng)性反應(yīng)的片段，并以此間接推測(cè)抗原表位分布區(qū)域及構(gòu)成表位的關(guān)鍵氨基酸(Mapping?of?antigenic?sites?on?the?nucleocapsid?protein?of?the?severe?acute?respiratory?syndrome?coronavirus.J?Clin?Microbiol.2004?Nov；42(11)：5309-14.蛋白質(zhì)B細(xì)胞抗原表位測(cè)定方法的研究進(jìn)展，黑龍江畜牧獸醫(yī)，2008，7：23-24)。此方法篩選出的表位為線性表位，而天然完整蛋白質(zhì)的抗原表位中，僅10％為線性抗原表位，90％是構(gòu)象型表位，因此傳統(tǒng)方法篩選的序列肽僅模擬蛋白質(zhì)的線性表位，難以形成構(gòu)象表位。而且這種方法存在工作量大，工作效率低，成本高等缺陷。