[發明專利]發酵萎縮芽孢桿菌制備Bacillamide C的培養基及其制備及應用方法

有效

• 申請號: 201010278110.6
• 申請日: 2010-09-10
• 公開（公告）號: CN101948891A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 金靚婕;李志勇;張風麗
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C12R1/07
• 代理公司: 上海交達專利事務所 31201
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

技術領域

本發明涉及的是一種細菌培養技術領域的培養基及其制備，具體是一種發酵萎縮芽孢桿菌制備Bacillamide?C的培養基及其制備及應用方法。?

背景技術

與陸地生物相比，海洋生物生活于高鹽、高壓、低溫、稀營養等條件嚴苛的環境中。為求生存，很多海洋生物在長期的進化過程中產生一些結構獨特的化學物質。從海洋生物中已發現多種活性物質，包括抗腫瘤化合物、腫瘤促進劑、抗炎癥/過敏化合物、抗菌、抗病毒化合物、生物毒素、抗寄生蟲化合物、多不飽和脂肪酸等，其中相當部分生物活性物質是陸地生物所沒有的。這些海洋生物活性物質具有種類繁多、結構特異復雜等特點。在眾多海洋生物中，海綿是目前發現活性物質最豐富的海洋生物之一，人們對海綿活性物質寄予極大的希望，但海綿體內的活性物質含量很低，捕撈海綿資源有限，藥源的供給不足使得海綿藥物開發明顯滯后。為尋找穩定可靠的藥源，進行大規模生產，開展相關海綿共附生微生物的研究是迫切而重要的工作。?

經過對現有技術的檢索發現，于璐璐等(Lu-Lu?Yu?et?al.，Helvetica?Chimica?Acta2009；92：607-611)從來自中國南海的貪婪倔海綿萎縮芽孢桿菌Bacillus?atrophaeus?C89菌液的乙酸乙酯萃取物中，分離到一種結構較新的化合物Bacillamide?C。Bacillamides家族化合物及其衍生物已被證實對多環旋溝藻、藍藻和微藻有不同程度的抑制作用。藻類引起的赤潮和水華對生態、經濟和人類健康的威脅日益嚴重，因而該家族作為潛在的抑藻劑有很高的研究價值和應用價值。?

發明內容

本發明針對現有技術存在的上述缺點，提供一種發酵萎縮芽孢桿菌制備Bacillamide?C的培養基及其制備及應用方法，不僅能滿足搖瓶實驗的需要，亦能滿足發酵罐發酵大量制備Bacillamide?C的要求。?

本發明是通過以下技術方案實現的：?

本發明涉及一種用于萎縮芽孢桿菌的培養基，其組分及含量為：3.64g/L玉米淀粉、6.0g/L胰蛋白胨、6.29g/L碳酸鈣、4.0g/L大豆蛋白胨、0.10g/L半胱氨酸和0.02g/L色氨酸，溶劑為人工海水。?

所述的人工海水的組份及含量為：26.518g/L的NaCl、2.447g/L的MgCl₂、3.305g/L的?MgSO₄、1.141g/L的CaCl₂、0.725g/L的KCl、0.202g/L的NaHCO₃以及0.083g/L的NaBr，溶劑為Millpore超純水，該人工海水的pH?7.0-7.2。?

本發明涉及上述用于萎縮芽孢桿菌培養基的制備方法，包括以下步驟：?

第一步、配制人工海水：分別將NaCl、MgCl₂、MgSO₄、CaCl₂、KCl、NaHCO₃以及NaBr溶解于超純水中后進一步混合。?

第二步、在人工海水中加入玉米淀粉并加熱煮沸糊化，然后依次加入胰蛋白胨、大豆蛋白胨和碳酸鈣并攪拌溶解，然后進行高溫殺菌得到培養基。?

所述的攪拌溶解過程中不斷補充純水補足玉米淀粉蒸煮過程中失去的水分。?

所述的高溫殺菌是指在121℃環境下滅菌20分鐘。?

本發明涉及上述培養基的應用方法，通過將半胱氨酸和色氨酸溶解于人工海水中配成混合氨基酸溶液并采用過濾膜進行過濾，然后將所述培養基對發酵萎縮芽孢桿菌進行發酵培養，在發酵培養過程中添加過濾后的混合氨基酸溶液，實現萎縮芽孢桿菌產量的優化。?

所述的混合氨基酸溶液中含有半胱氨酸0.10g/L以及色氨酸0.02g/L。?

采用本發明方法成功的對萎縮芽孢桿菌產Bacillamide?C的培養基成分進行了優化。在搖瓶水平上，將菌種分別接種到基本培養基和最優培養基中，比較兩種培養基中菌種的生長情況和產Bacillamide?C的情況。?