[發明專利]一種豬細小病毒滅活疫苗的制備方法

有效

• 申請號: 201010277502.0
• 申請日: 2010-09-09
• 公開（公告）號: CN101947318A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 李玉和;史春云;刁文華;潘杰;傅元華
• 申請（專利權）人: 揚州優邦生物制藥有限公司;揚州威克生物工程有限公司
• 主分類號: A61K39/23
• 分類號: A61K39/23;C12N7/00;A61P31/20
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

1.一種豬細小病毒滅活疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)ST細胞或IBRS-2細胞的復蘇培養；

用方瓶培養從液氮中復蘇的ST細胞或IBRS-2細胞，培養條件包括：pH值7.0～7.3、溫度35～37℃，培養基為DMEM；培養48～72h，培養至細胞濃度為3～6×10⁵cells/ml，即可；

(2)ST細胞或IBRS-2細胞的生物反應器微載體培養；

細胞接種密度為1～2×10⁵cells/ml，微載體濃度為3～5g/L，溶氧為30％～60％，pH值7.0～7.3，溫度35～37℃，轉速40～60r/min，培養基為DMEM；培養至細胞濃度為3～5×10⁶cells/ml；其中，微載體為球狀載體Cytodex1或片狀載體；

(3)ST細胞或IBRS-2細胞的生物反應器微載體的連續培養；

以一定速度向生物反應器中連續添加新鮮的DMEM培養基，同時用相同的速度向外排出培養好的ST細胞或IBRS-2細胞，保證ST細胞或IBRS-2細胞在反應器中停留時間內擴增至濃度為3～5×10⁶cells/ml，即可；

(4)接種豬細小病毒培養；

將豬細小病毒接種于連續培養ST細胞或IBRS-2細胞的生物反應器中進行培養，接種MOI為0.01，培養條件包括：溶氧30-60％、PH值7.1-7.4、溫度35-37℃，使病毒含量達到≥10^6.0TCID₅₀/ml；

(5)收集病毒液，滅活病毒，制成豬細小病毒滅活疫苗。

2.根據權利要求1所述的豬細小病毒滅活疫苗的制備方法，其特征在于：在步驟(1)中，在所述的DMEM培養基中，添加有體積濃度為5～10％的血清。

3.根據權利要求1所述的豬細小病毒滅活疫苗的制備方法，其特征在于：步驟(3)中，所述的一定速度為2～3個生物反應器體積/天。

4.根據權利要求1所述的豬細小病毒滅活疫苗的制備方法，其特征在于：步驟(4)中，在培養過程中，監控葡萄糖的消耗、乳酸的產生和氨的產生，并對球狀載體Cytodex1上細胞進行計數。

5.根據權利要求4所述的豬細小病毒滅活疫苗的制備方法，其特征在于：所述的球狀載體Cytodex1上細胞計數，先用PBS漂洗2次，經0.1％結晶紫的檸檬酸溶液染色，用血球計數板計數細胞核。

6.根據權利要求1所述的豬細小病毒滅活疫苗的制備方法所制得的疫苗產品。