[發明專利]一種利用顛茄外植體誘導胚性細胞的方法

無效

• 申請號: 201010276244.4
• 申請日: 2010-09-09
• 公開（公告）號: CN102396417A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 廖志華;楊春賢;陳敏;唐克軒;張磊
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 重慶華科專利事務所 50123
• 代理人: 康海燕

1.一種利用顛茄外植體誘導胚性細胞的方法，特征在于附加2,4-D?3.0mg/L的MS固體培養基MSA誘導胚性細胞，胚性細胞在以附加2,4-D?2.0mg/L的MS固體培養基MSB上篩選、繼代培養，其過程包括：

（1）在顛茄無菌苗長側芽誘導胚性細胞，誘導胚性細胞，以附加2,4-D?3.0mg/L的MS固體培養基MSA誘導胚性細胞；

（2）胚性細胞的擴繁繼代：將胚性細胞在以附加2,4-D?2.0mg/L的MS固體培養基MSB上篩選、繼代培養，在附加2,4-D?2.0mg/L、0.2mg/mL?6-芐氨基嘌呤(6-BA)、2.2g/L?KCl、40g/L蔗糖的MS液體培養基LMS上懸浮培養；

（3）胚性細胞誘導植株再生：將胚性細胞在MS培養基上再生完成植株重建。

2.根據權利要求1所述的利用顛茄無菌苗誘導胚性細胞的方法，其特征在于：無菌苗或者繼代苗長至5片葉以上時，去除頂芽和葉片，繼續培養2天以上，誘導側芽發生后，在體視顯微鏡下剝離莖尖，接種于體細胞胚誘導培養基上培養。

3.根據權利要求1所述的利用顛茄無菌苗誘導胚性細胞的方法，其特征在于：所述顛茄胚性細胞要不斷進行純化，其方法是在體視顯微鏡放大篩選誘導出來的典型胚性細胞，在新的MSB培養基上繼代、保存。

4.根據權利要求1所述的利用顛茄無菌苗誘導胚性細胞的方法，其特征在于：所述步驟（3）中的利用胚性細胞懸浮培養使用較高濃度的KCl和蔗糖的液體培養基，即附加2,4-D?2.0mg/L、0.2mg/mL?6-芐氨基嘌呤(6-BA)、2.2g/L?KCl、40g/L蔗糖的MS液體培養基。