[發明專利]通過檢測DNA濃度測定基質中食用菌菌絲生物量的方法

無效

• 申請號: 201010275831.1
• 申請日: 2010-09-08
• 公開（公告）號: CN101914630A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 曹暉;余昌霞;陳明杰;汪虹
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/06;G01N21/33
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達;謝文凱

1.一種通過檢測DNA濃度測定栽培基質中食用菌菌絲生物量的方法，包括下列步驟：

(1)培養標準菌絲

取待測食用菌斜面培養物，活化后打碎，接入新鮮的標準液體培養基中，搖床培養至菌絲穩定期；

(2)菌絲處理

過濾上述菌絲，無菌水沖洗，冷凍并充分干燥；

(3)構建標準曲線

將步驟(2)處理后的菌絲迅速研磨，梯度稱取后置于容器中，用CTAB法提取DNA，NANODROP?1000紫外分光光度計確定DNA量，構建提取DNA量和提取用菌絲量的關聯標準曲線；

(4)相應基質DNA水平確定

取相應基質，用CTAB法提取DNA，NANODROP?1000紫外分光光度計確定基質DNA本底水平；

(5)培養菌絲與基質混合，確定相應基質對DNA提取的影響

稱取步驟(2)處理后的菌絲與上述基質混合，用CTAB法提取DNA，NANODROP?1000紫外分光光度計確定DNA量，與步驟(3)和(4)的結果比較，確定該種基質對DNA提取的影響；

(6)待測樣品中食用菌菌絲生物量的確定

取待測樣品，充分干燥，研磨，定量秤取后用CTAB法提取DNA，NANODROP?1000紫外分光光度計確定DNA量，對照標準曲線、基質本底和基質影響，確定含有基質的樣品中食用菌菌絲的生物量。

2.根據權利要求1所述的一種通過檢測DNA濃度測定栽培基質中食用菌菌絲生物量的方法，其特征在于：所述步驟(1)中的菌絲為香菇135菌絲。

3.根據權利要求1所述的一種通過檢測DNA濃度測定栽培基質中食用菌菌絲生物量的方法，其特征在于：所述步驟(1)中的標準液體培養基為PDB培養基。

4.根據權利要求1所述的一種通過檢測DNA濃度測定栽培基質中食用菌菌絲生物量的方法，其特征在于：所述步驟(2)中的處理后的菌絲含水量接近零，且DNA在冷凍的條件下不易降解。

5.根據權利要求1所述的一種通過檢測DNA濃度測定栽培基質中食用菌菌絲生物量的方法，其特征在于：所述步驟(2)使用冷凍干燥機充分干燥。

6.根據權利要求1所述的一種通過檢測DNA濃度測定栽培基質中食用菌菌絲生物量的方法，其特征在于：所述步驟(3)中用CTAB法提取DNA，每處理5個重復。

7.根據權利要求1所述的一種通過檢測DNA濃度測定栽培基質中食用菌菌絲生物量的方法，其特征在于：所述步驟(4)中相應基質包括主料和輔料，其中主料為木屑、稻草、棉籽殼、甘蔗渣、玉米芯或麥秸，輔料為麩皮、米糠或豆餅。

8.根據權利要求1或7所述的一種通過檢測DNA濃度測定栽培基質中食用菌菌絲生物量的方法，其特征在于：所述的相應基質取木屑先浸泡12-24h，再與麩皮混合，調整含水量至50％-60％，滅菌，然后冷凍至固態，再充分干燥。

9.根據權利要求1所述的一種通過檢測DNA濃度測定栽培基質中食用菌菌絲生物量的方法，其特征在于：所述步驟(5)中的菌絲與相應基質的質量比為1∶4或3∶7。