[發明專利]一種與乳腺癌相關的血清/血漿miRNA標志物及其應用

有效

• 申請號: 201010275557.8
• 申請日: 2010-09-08
• 公開（公告）號: CN101921760A
• 公開（公告）日: 2010-12-22
• 發明（設計）人: 沈洪兵;胡志斌;張辰宇;馬紅霞;董靜
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;劉成群

發明領域

本發明屬于基因工程及腫瘤學領域，涉及一種與乳腺癌相關的血清/血漿miRNA標志物及其應用。

背景技術

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤。據估計，全球2002年新發乳腺癌病例達115萬，占女性全部惡性腫瘤發病的23％，預計2010年將達到140-150萬。在我國，乳腺癌的發病率與西方國家相比較低，但近二十年來，其呈現顯著增長趨勢，平均年增長率達3-4％，遠遠高于0.5％的世界平均增長水平。雖然乳腺癌的預后較好，但是由于其發病率較高，仍然是女性因癌癥死亡的首要原因。在我國北京，上海，天津等城市乳腺癌發病率已高居女性惡性腫瘤發病的第一位、第二位。在2000年到2005年這5年間，我國女性乳腺癌患者增加了38.5％，每年因乳腺癌死亡的女性達1.3萬人。乳腺癌已成為威脅我國女性健康的首要惡性腫瘤，是亟待解決的重大公共衛生問題。

乳腺癌目前雖無特殊的預防措施，但是若能早期發現、早期診斷、早期治療，預后情況一般較好。所以，當前及將來相當一段時間內，爭取早期診斷仍是乳腺癌防治的一項基本策略。目前早期診斷乳腺癌的方式主要有乳腺自檢，乳腺鉬靶X線攝影、乳腺彩色多譜勒超聲檢查、乳腺導管內視鏡檢查、乳腺導管灌洗、CT和磁共振等，若有無法辨別的腫塊或膿腫可進行細胞學穿刺檢查。盡管近年來乳腺癌的診斷水平不斷上升，但真正較為成熟或有較好應用前景的乳腺癌診斷手段尚不多，有些早期乳腺癌患者由于腫塊較小，或浸潤較輕、呈膨脹性生長、表現為光滑、活動、邊界清楚，與良性腫瘤不易區別。此外，由于涉及社會文化倫理等方面問題，一些年輕女性對于乳腺檢查容易忽視或產生抗拒心理，不但不能保證診斷對癌癥患者診斷的準確性，對于處于早期階段的乳腺癌患者，尤其是年輕患者的診斷能力更為有限。因此，我們亟需發現更加明確而有效的生物標志物，對乳腺癌做出明確的早期診斷，這將有助于乳腺癌患者做出早期治療，提高生存率。

MicroRNAs(即miRNAs)是近年來腫瘤分子生物學研究領域的一個熱點，它的成熟狀態是一類長約19-23個核苷酸的小單鏈RNA分子，進化上具有高度保守性。它廣泛存在于真核生物中，是一組不編碼蛋白質的短序列RNA，其本身不具有開放閱讀框(ORF)。MiRNA的主要功能是調節生物體內在的與機體生長、發育、疾病發生過程有關的基因的表達。自從參與調控線蟲時序發育的lin-4與let-7被發現以來，miRNA分別在2002年和2003年兩度入選Science雜志年度十大科技突破。2005年預測miRNAs至少能調控5300個人類基因，即所有基因的30％。隨著研究的深入，越來越多的miRNAs不斷被發現。聚光燈下的miRNA已經逐步擺脫了DNA光芒的掩蓋，從“配角”變成“主角”，并且對DNA的中心地位提出了新的挑戰。近年來，miRNA與腫瘤的關系已經成為研究的熱點和重點，已經發現miRNA通過負調控基因的表達與肺癌，乳腺癌，胃癌，乳腺癌等的發病高度相關。

研究已經證實血清/血漿中存在幾百種的miRNAs，這些小分子RNAs性質穩定、含量豐富、易于定量檢測，且存在顯著的疾病特異性。現有的成熟的技術，包括定性和定量miRNA分子的技術，表明利用血清miRNAs作為分子生物標志物的方法比傳統的特異蛋白分子標記方法將更加有效，為生物標志物開拓了新境界。

然而，目前還沒有用于乳腺癌診斷的較為穩定的生物標志物的報道，若能篩選出乳腺癌異常表達的血清/血漿miRNAs作為生物標志物，并研制相應的診斷試劑盒，對我國乳腺癌的診斷現狀必將是一次有力的推動。

發明內容

本發明的首要目的是針對上述技術問題，提出一種與乳腺癌相關的血清/血漿miRNA標志物。

本發明的第二個目的是提供上述血清/血漿miRNA標志物的引物。

本發明的第三個目的是提供上述血清/血漿miRNA標志物及其引物在制備乳腺癌輔助診斷試劑盒中的應用。

本發明第四個目的是提供輔助乳腺癌診斷的試劑盒。

發明人通過分離和研究乳腺癌患者及與其年齡匹配的健康女性對照血清/血漿中的miRNAs，尋找一組與乳腺癌高度相關的高特異性和敏感性的miRNAs，并研制出可便于臨床應用的乳腺癌診斷試劑盒，為乳腺癌的篩查和診斷提供數據支持，為發現具有潛在治療價值的新型小分子藥物提供數據支持。

本發明的目的是通過下列技術方案實現的：

一種與乳腺癌相關的血清/血漿miRNA標志物，該標志物為miR-16、miR-25、miR-222和miR-324-3p的組合。

所述的血清/血漿miRNA標志物的引物，這些引物為：