[發明專利]一種高通量的大豆轉基因方法

有效

• 申請號: 201010273113.0
• 申請日: 2010-09-06
• 公開（公告）號: CN101948869A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 安成才;黃萍;楊揚;任姣;鄔倩;滑瑞;何善平;付力文;張起濤;于祥春
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00;A01H5/10;C12Q1/68;G01N33/53
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種大豆轉基因方法，包括如下步驟：在大豆花的柱頭上滴加基因轉化液，成熟后收獲種子。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述基因轉化液是含待轉基因的質粒懸浮液。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：所述含待轉基因的質粒是將待轉基因插入到含Bar基因的pGREEN載體的多克隆位點間得到的重組質粒。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于：所述基因轉化液是將待轉基因的質粒置于0.1×SSC緩沖液中，得到所述基因轉化液，所述待轉基因的質粒在所述基因轉化液中含量50-100ug/ml，優選是70ug/ml。

5.如權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述含待轉基因的質粒懸浮液滴加在所述柱頭的體積是5-8μl。

6.如權利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述大豆花是花冠高于花萼0-2mm的花蕾。

7.如權利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述大豆花的柱頭上滴加基因轉化液的步驟進行兩次，兩次間隔時間為2小時之內。

8.如權利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：所述方法還包括在所述收獲種子步驟之后進行種子萌發得到轉基因大豆植株；所述方法優選還包括在所述種子萌發后的篩選，所述篩選包括如下步驟：在所述種子出苗后從真葉完全展開至第1三出葉展開之前，在葉面上噴灑除草劑。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于：所述除草劑是濃度為0.8-1.2‰(體積濃度)的草胺磷水溶液；所述除草劑噴灑量150毫升/平方米土，每平方土種植320棵苗；所述葉面噴灑的次數為2次，2次間隔7天。

10.如權利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述篩選還包括葉面噴灑除草劑后的分子生物學檢測，優選是PCR檢測、Southern?blot檢測和/或Western?blot檢測；所述PCR檢測的所用引物是序列表中序列2和序列3。