[發(fā)明專利]一種能提高乳酸芽孢桿菌活菌數(shù)的培養(yǎng)基

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010270704.2
• 申請日: 2010-08-31
• 公開（公告）號: CN101948783A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭文才;曹要玲
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州廣牧豐生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/07
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 余炳和

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種能提高乳酸芽孢桿菌活菌數(shù)的培養(yǎng)基。

背景技術(shù)：

自上世紀50年代開始，抗生素作為生長促進劑廣泛的應(yīng)用于飼料中。但由于抗生素的長期使用，導(dǎo)致動物腸道正常菌群失調(diào)，產(chǎn)生耐藥菌株，而且抗生素在畜禽產(chǎn)品中的殘留直接影響人類的健康安全和生態(tài)環(huán)境。很多國家和飼養(yǎng)者反對抗生素作為生長促進劑，歐盟和美國等許多國家都已經(jīng)從立法上限制了抗生素的使用。在我國，由于近幾年來發(fā)生的食品安全事件，人們的健康意識不斷增強以及對綠色健康食品的日趨熱衷，尋找對動物和人類有益無害的飼料藥物和抗生素替代品是急需解決的問題。

益生菌制劑是最有前途的抗生素替代品，無論在食品還是飼料中，益生菌的生理功效已得到人們的一致認同。益生菌在國內(nèi)外都有非常廣泛的應(yīng)用。目前美國FDA準許直接飼喂的微生物有40多種，年使用量在30萬噸以上；在歐洲僅法國市場上銷售的益生菌制劑品種就不下50個；日本及東南亞等國對益生菌的使用也十分普遍，估計使用量也在10000噸以上；我國農(nóng)業(yè)部第1126號公告公布的允許使用的飼料添加劑品種目錄中，飼料級微生物添加劑有16種。隨著養(yǎng)殖戶對益生菌的認識不斷深入及對抗生素弊端的認識，益生菌制劑的使用量在逐年增加，目前估計年使用量在10萬噸以上。

在益生菌制劑中最受人們關(guān)注的就是乳酸菌制劑，乳酸菌是動物腸道的優(yōu)勢菌群之一，能產(chǎn)酸和細菌素，抑制有害菌的生長繁殖，維持腸道菌群平衡，還能產(chǎn)生免疫活性，而且能活體進入腸道的乳酸菌比死菌的作用大得多，但是一般乳酸菌的營養(yǎng)要求較高，對不良環(huán)境的抵抗力差，特別是抗干燥、抗高溫的能力較弱，保存性都差，不利于飼料的加工、運輸和貯存。作為活性因子，耐胃酸并順利到達腸道及定植存活的能力較弱。而乳酸芽孢桿菌，其學(xué)名為凝結(jié)芽孢桿菌(Bacillus?coagulans)，該菌除具備普通乳酸菌的優(yōu)點外，還具備耐酸、耐熱、耐干燥的特點，芽孢的產(chǎn)生可以防止生產(chǎn)和貯存過程中菌數(shù)衰減的問題。乳酸芽孢桿菌在動物生產(chǎn)中有很重要的作用，具體的作用方式為乳酸芽孢桿菌進入動物機體后，能在胃腸道中產(chǎn)生乳酸等物質(zhì)，能降低胃中pH值，不僅激活胃蛋白酶原轉(zhuǎn)化為胃蛋白酶，促進動物體對蛋白飼料的消化，同時還為動物機體內(nèi)優(yōu)勢菌群(乳酸菌、雙歧桿菌等)創(chuàng)造有利于生長繁殖的環(huán)境，減少有害菌的侵害。乳酸芽孢桿菌產(chǎn)生的細菌素能粘附于有害菌的細胞膜上，使有害菌細胞膜表面形成通透性通道，胞內(nèi)物質(zhì)流失而導(dǎo)致有害菌死亡。該益生菌還能分泌大量的酶類，在補充動物體自身酶源不足外，還能促進飼料消化，尤其是大腸后段的飼料消化，減少氨氮等的排放，改善畜舍環(huán)境，是一種非常適合飼料和養(yǎng)殖業(yè)應(yīng)用的益生菌。

為了更好將乳酸芽孢桿菌進行工業(yè)化生產(chǎn)，國內(nèi)的科研人員對乳酸芽孢桿菌進行了大量的研究工作。篩選培養(yǎng)基成分以提高其活菌數(shù)就是其中之一。劉鑫2002年碩士論文中得出芽孢乳酸桿菌(凝結(jié)芽孢桿菌TQ33)的高密度培養(yǎng)的發(fā)酵培養(yǎng)基為(g/L)：蛋白胨：10；酵母膏：10；葡萄糖：6；MgSO4.7H2O：1；K2PO4：2；MnSO4：50ppm，用過濾培養(yǎng)法獲得最終菌體濃度為1.5×10¹⁰CFU/mL。葛風(fēng)清等(2007)用麩皮、豆粕和無機離子做培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)56h，在優(yōu)化后的培養(yǎng)條件下，生物量達到19.68。崔東良等(2007)利用優(yōu)化后培養(yǎng)基(玉米粉15g/L?豆粕粉10g/L(NH4)2SO46g/L玉米漿6g/L?MgSO4.7H2O?1g/LK2HPO4.3H2O?2g/L?MnSO4?0.05g/L)培養(yǎng)培養(yǎng)24h活菌數(shù)量達到7.5×10⁹CFU/mL，36h活菌數(shù)量達到9.3×10⁹CFU/mL。王進華等(2003)發(fā)酵培養(yǎng)凝結(jié)芽孢桿菌產(chǎn)生7.5×10⁷CFU/mL以上的芽孢(活菌計數(shù))，占總菌數(shù)的52-58％。

按目前的研究成果來看，乳酸芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基組成不盡相同，但總體活菌數(shù)還是偏低，選擇一種乳酸芽孢桿菌高活菌數(shù)的培養(yǎng)基組成對于工業(yè)化生產(chǎn)有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是提供一種能提高乳酸芽孢桿菌活菌數(shù)的培養(yǎng)基。

本發(fā)明通過添加一定比例的生物素和維生素E，并且調(diào)整菌種生長所需的碳源、氮源和無機離子的比例，提高了乳酸芽孢桿菌的萌發(fā)和生長數(shù)量，提高乳酸芽孢桿菌活菌數(shù)，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。