[發(fā)明專利]蛭弧菌游泳體在制備防治大菱鲆紅嘴病菌劑中的應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010268459.1
• 申請(qǐng)日: 2010-08-31
• 公開（公告）號(hào): CN102007941A
• 公開（公告）日: 2011-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡俊鵬;鮑星
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南理工大學(xué)
• 主分類號(hào): A01N63/00
• 分類號(hào): A01N63/00;A01P1/00;A61K35/74;A61P31/04
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種菌類的應(yīng)用，特別涉及蛭弧菌蛭質(zhì)體在制備防治大菱鲆紅嘴病菌劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

大菱鲆(Scophthalmus?maximus)是原產(chǎn)于歐洲的一種名貴鲆鰈類，隸屬于鰈形目，鲆科，菱鲆屬。主要分布于大西洋沿岸、北海、黑海及地中海一帶。由于它具有適應(yīng)低水溫生活，生長速度快，肉質(zhì)鮮美，容易接受人工飼料，易于集約化養(yǎng)殖等優(yōu)點(diǎn)，相繼成為歐洲及南美智利等許多國家的主要養(yǎng)殖開發(fā)對(duì)象。自1992年大菱鲆被引入我國以來，其養(yǎng)殖已從山東快速輻射到北方沿海各省，成為我國海水養(yǎng)殖的一個(gè)支柱產(chǎn)業(yè)，取得了良好的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。然而，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，大菱鲆的疾病問題日漸突出，大規(guī)模死亡現(xiàn)象頻繁發(fā)生，藥物殘留問題也日漸嚴(yán)重，給大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展帶來極為不利的影響。紅嘴病就是其中一種，給養(yǎng)殖業(yè)者造成了慘重的經(jīng)濟(jì)損失。紅嘴病的主要癥狀表現(xiàn)為：病魚吻端及腹面上頜出血，部分魚鰓蓋有出血的潰爛小凹洞，口腔內(nèi)出血，部分病魚眼睛腫大突出、挑破外膜內(nèi)有大量膿液，腸道充血無食物，腸道末端有少量粘稠液體，肝臟充血、色暗淡呈糜散狀，脾臟腫大發(fā)紅。在治療過程中，養(yǎng)殖戶為追求經(jīng)濟(jì)效益，胡亂用藥等現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，致使農(nóng)藥殘留問題日趨嚴(yán)重。目前，防止病害主要的方法是采用的殺菌消毒藥物，但其本身存在著諸多缺點(diǎn)，如抗生素的使用導(dǎo)致的耐藥性及藥物殘留，2006年發(fā)生的大菱鲆呋喃類藥物藥殘事件就非常具有代表性。因此，如何進(jìn)行健康養(yǎng)殖，便成為的水產(chǎn)界亟待解決的問題。

蛭弧菌是寄生于其他細(xì)菌，并能導(dǎo)致宿主細(xì)菌裂解的一類細(xì)菌。比一般細(xì)菌小，能通過細(xì)菌濾器，有類似噬菌體的作用。單細(xì)胞，呈弧形或逗點(diǎn)狀，有時(shí)呈螺旋狀，大小0.2-0.6×0.8-1.2微米，端生鞭毛，多為一根。革蘭氏染色呈陰性，可裂解致病或潛在致病性細(xì)菌。蛭弧菌的生活史分兩個(gè)階段：自由生活，能運(yùn)動(dòng)，不進(jìn)行增殖的游泳體階段和在特定宿主細(xì)菌的周質(zhì)空間內(nèi)進(jìn)行生長繁殖的蛭質(zhì)體階段。蛭弧菌在游泳體階段，識(shí)別并與宿主發(fā)生不可逆結(jié)合，然后侵入宿主。蛭弧菌蛭質(zhì)體則是蛭弧菌在特定宿主細(xì)菌的周質(zhì)空間內(nèi)進(jìn)行生長繁殖的形式。蛭弧菌進(jìn)入宿主菌細(xì)胞周質(zhì)空間后，主要通過降解宿主細(xì)胞的大分子成為單體，然后攝入用于其生物大分子的合成。隨著細(xì)胞增殖和水解酶產(chǎn)生，使宿主細(xì)胞壁被破壞，從而裂解釋放出蛭弧菌。

蛭弧菌游泳體是指蛭弧菌侵入宿主細(xì)菌前的生長形式。蛭弧菌游泳體侵入宿主細(xì)菌的過程非常快，一般幾秒鐘內(nèi)即可完成。相對(duì)于蛭弧菌蛭質(zhì)體而言，雖然存在著制備繁瑣、不易保存的弱點(diǎn)，但用蛭弧菌游泳體控制和消除養(yǎng)殖池中的致病菌具有起效快、活力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。這些優(yōu)點(diǎn)使得蛭弧菌游泳體同樣適合作為抑止或清除生物體及其環(huán)境中致病菌的生物凈化因子，從而克服了抗生素濫用帶來的副作用。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服魚類養(yǎng)殖中濫用抗生素導(dǎo)致各種食品安全問題的不足之處，本發(fā)明提供一種蛭弧菌游泳體在制備防治大菱鲆紅嘴病菌劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

蛭弧菌游泳體在制備防治大菱鲆紅嘴病菌劑中的應(yīng)用。

所述蛭弧菌游泳體的制備方法為：接種宿主于營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中，在35℃和200rpm搖床培養(yǎng)12h，培養(yǎng)液經(jīng)4℃，5000～8000rpm離心10～20min后，沉淀加入至DNB液體培養(yǎng)基中，接入蛭弧菌BDM01，在溫度25～35℃下，以150～300rpm搖床培養(yǎng)36～48h，得到含蛭弧菌蛭質(zhì)體和蛭弧菌游泳體的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液在4℃溫度下以6000～8000rpm離心15～20min后，上清經(jīng)16000～18000rpm離心15～20min后，沉淀用DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0.2mol/L?pH值為7.2～7.6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到濃度為10⁶～10⁹pfu/mL的蛭弧菌游泳體菌液，該菌液即為防治大菱鲆紅嘴病菌劑。

所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio?sp.)BDM01，于2008年4月28日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M208066。

所述蛭弧菌游泳體在制備防治大菱鲆紅嘴病菌劑中的應(yīng)用是向水體中潑灑防治大菱鲆紅嘴病菌劑，每次換水之后向水體中均勻潑灑菌劑，使水體中蛭弧菌游泳體終濃度為10-10⁷pfu/mL。