[發明專利]功能性雙歧桿菌高密度培養及其凍干產品的制備方法

無效

• 申請號: 201010266356.1
• 申請日: 2010-08-30
• 公開（公告）號: CN101948775A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 張蘭威;杜明;吳海波;易華西;馬春麗;馮鎮;杜明;韓雪;李婧妍
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學;張蘭威
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 金永煥

1.功能性雙歧桿菌高密度培養，其特征在于功能性雙歧桿菌高密度培養按以下步驟進行：一、將經過耐氧馴化的功能性雙歧桿菌接種到發酵罐的增菌培養基中，在溫度為35～37℃、pH值為6.5～6.8的條件下培養15～17h，得發酵液；二、發酵液在0～20℃時，加入與發酵液等重量的質量濃度為10％的檸檬酸鈉溶液或質量濃度為10％的磷酸鈉溶液對發酵液進行蛋白的洗脫，再加入質量濃度為0.2～2％的殼聚糖進行菌體的絮凝；三、絮凝后的發酵液使用孔徑為100～200nm、面積為0.5m²的陶瓷膜，在跨膜壓力為110KPa進行膜濃縮處理至絮凝后的發酵液的濃縮倍數達到6，得到含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產物，即完成功能性雙歧桿菌高密度培養；其中步驟一中接種量為2％；步驟一中增菌培養基由80～120g的脫脂乳粉，40～60g的胰蛋白酶水解乳清粉，30～60g的番茄汁、30～60g的麥芽汁、10～30g乳糖、0.50～0.70g的酵母膏或酵母粉、6.8～7.2mg的腺嘌呤和50～54mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至1000mL組成；步驟三中膜濃縮處理的方式為兩個陶瓷膜管串聯。

2.根據權利要求1所述的功能性雙歧桿菌高密度培養，其特征在于步驟一中采用中和劑調節增菌培養基的pH值，中和劑為質量濃度為10～15％的氫氧化鈉、質量濃度為10～15％的氨水或質量濃度為20％的Na₂CO₃；步驟一中培養15～17h的過程中需補加乳糖，乳糖補加量為所消耗的中和劑中堿性物質摩爾量的3～5倍，同時采用D301型樹脂吸附培養過程中產生的鈉鹽。

3.根據權利要求1或2所述的功能性雙歧桿菌高密度培養，其特征在于步驟一中在溫度為36℃、pH值為6.6的條件下培養16h，得發酵液。

4.根據權利要求3所述的功能性雙歧桿菌高密度培養，其特征在于步驟一中增菌培養基由90～110g的脫脂乳粉，45～55g的胰蛋白酶水解乳清粉，40～50g的番茄汁、40～50g的麥芽汁、15～25g乳糖、0.55～0.65g的酵母膏或酵母粉、6.9～7.1mg的腺嘌呤和51～53mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至1000mL組成。

5.根據權利要求3所述的功能性雙歧桿菌高密度培養，其特征在于步驟一中增菌培養基由100g的脫脂乳粉，50g的胰蛋白酶水解乳清粉，45g的番茄汁、45g的麥芽汁、20g乳糖、0.60g的酵母膏或酵母粉、7mg的腺嘌呤和52mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至1000mL組成。

6.根據權利要求4或5所述的功能性雙歧桿菌高密度培養，其特征在于步驟二中加入質量濃度為0.5～1.5％的殼聚糖進行菌體的絮凝。

7.根據權利要求4或5所述的功能性雙歧桿菌高密度培養，其特征在于步驟二中加入質量濃度為2％的殼聚糖進行菌體的絮凝。

8.制備如權利要求1所述的功能性雙歧桿菌高密度培養的所得功能性雙歧桿菌凍干產品的方法，其特征在于功能性雙歧桿菌凍干產品的制備方法按以下步驟進行：一、按重量比1∶1～2將含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產物與冷凍保護劑混合，在溫度0～10℃的條件下進行10～12h的冷凍前預冷處理，得混合物；二、將混合物置于-70℃冷凍機的冷凍盤中進行預凍，直至混合物的溫度達到-45℃，保持30min，然后以5℃/30min的速率升溫至-28℃，并維持此溫度至真空度達到0.05MPa完成主干燥階段，再升溫至10℃并維持此溫度至真空度達到0.03MPa完成解析干燥階段，取出后用顆粒機粉碎，再用無菌鋁箔紙盒包裝并置于-20℃的環境中貯藏，即完成功能性雙歧桿菌凍干產品的制備；其中步驟一中冷凍保護劑10～20g的脫脂乳粉、1～3g的甘油、1～2g的維生素C、0.5～1g的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖和3～15g的海藻糖加入蒸餾水并定容至1000mL組成；步驟二中混合物置于-70℃冷凍機的冷凍盤中的大小為長40cm×寬50cm×高20mm。

9.根據權利要求8所述的功能性雙歧桿菌凍干產品的制備方法，其特征在于步驟一中按重量比1∶1.5將含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產物與冷凍保護劑混合，在溫度5℃的條件下進行11h的冷凍前預冷處理，得混合物。

10.根據權利要求8或9所述的功能性雙歧桿菌凍干產品的制備方法，其特征在于步驟一中冷凍保護劑15g的脫脂乳粉、2g的甘油、1.5g的維生素C、0.8g的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖和8g的海藻糖加入蒸餾水并定容至1000mL組成。