[發明專利]檢測手足口病患者EV71-VP1抗體在預測病情轉歸中的應用

無效

• 申請號: 201010265847.4
• 申請日: 2010-08-30
• 公開（公告）號: CN101936994A
• 公開（公告）日: 2011-01-05
• 發明（設計）人: 孟紅;蓋中濤;岳盈盈;李鵬;宋楠楠;李志會;張穎
• 申請（專利權）人: 山東省醫學科學院基礎醫學研究所;濟南市傳染病醫院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/545
• 代理公司: 濟南圣達專利商標事務所有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

技術領域

本發明涉及一種滴定手足口患者EV71IgM抗體和EV71IgG抗體滴度的成套試劑及其在預測手足口病患者病情轉歸中的應用。

背景技術

手足口病重癥的病原主要是腸道病毒屬71血清型(EV71)，其主要臨床表現為神經系統損害、伴有/或心、肺損傷甚至功能衰竭。臨床上病情發展往往不可預測，狀況尚好患兒可在短時間內發生急轉直下的變化，甚至暴死。重癥患者給予及時的被動免疫治療(比如免疫球蛋白、恢復期血清等)可使病情轉危為安。但是重癥的發生發展少見預兆，臨床上也缺乏參考指標，因此臨床掌控治療時機非常困難。

發生重癥的原因一般認為有二，一是病原學理論，二是免疫學理論。

病原學理論認為，EV71為小RNA科病毒，其堿基易發生突變、同源重組、甚至丟失、插入等，隨時產生病毒突變株，這種隨機的變異導致了臨床病例輕重不同和組織器官損傷差異的多樣性；

免疫學理論認為，腸道病毒屬家族龐大、親緣關系錯綜復雜，結構蛋白VP1用于血清型別的分類。但型別間VP1存在同源序列，抗原性有交叉，因此機體在感染某種腸道病毒產生的免疫記憶，可被不同血清型的腸道病毒喚醒。如果手足口患者之前曾感染親緣密切的病毒，那么在感染EV71重癥病原時，機體表現出快速有效的免疫應答，細胞免疫迅速活躍、抗體在短時間內升高。

從上述免疫學理論可以看出，即便同是重癥病原，感染免疫基礎不同的機體可產生不同的臨床表現，免疫基礎是病情轉歸的關鍵因素，提示患兒早期抗體水平與病情轉歸之間存在相關性。采用ELISA方法檢測患者抗體，可為臨床判斷EV71患兒的轉歸、預警重癥發生、決策治療方案和掌控治療時機提供重要的參考依據。

抗體水平多用于評價疫苗免疫效果。近年來在麻疹的大規模的爆發流行中，科學家利用麻疹抗體研究和評價了疫苗免疫策略^[1]，利用抗體水平預測病情的轉歸規律已在出血熱研究中見有報道，MacNeil?A^[2]報道病毒特異性IgG、IgM水平預測出血熱轉歸中起著重要的作用等。

1Lee?MS，Nokes?DJ：Predicting?and?comparing?long-term?measles?antibody?profiles?of?differentimmunization?policies.Bull?World?Health?Organ.2001；79(7)：615-24.

2MacNeil?A，Comer?JA，：Sin?Nombre?virus-specific?immunoglobulin?M?and?G?kinetics?in?hantaviruspulmonary?syndrome?and?the?role?played?by?serologic?responses?in?predicting?disease?outcome.J?InfectDis.2010Jul?15；202(2)：2

發明內容

針對上述現有技術，本發明提供了一種檢測手足口病患者抗體滴度的成套試劑，本發明的成套試劑可用于檢測手足口病患者的抗體滴度，檢測結果可以作為預測病情轉歸的判斷依據，從而使臨床重癥可預測、可預防、可控制，減少死亡病例的發生。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種滴定手足口患者EV71IgM抗體和EV71IgG抗體滴度的成套試劑，包括酶標板和檢測試劑；其中，所述EV71IgM抗體的酶標板包括聚苯乙烯板，聚苯乙烯板孔內包被有IgM捕獲抗體，EV71IgG抗體的酶標板包括聚苯乙烯板，聚苯乙烯板孔內包被有IgM捕獲抗體；所述檢測試劑為辣根過氧化酶標記的EV71?VP1。

所述酶標板是通過以下方法制備的：鼠抗人IgG抗體、IgM抗體作為捕獲抗體，分別以1×10^-5、1×10^-6稀釋后分別包被聚苯乙烯板，并用公知方法封閉、洗板，4℃存放；所述稀釋液為pH9.6的碳酸鹽緩沖液。

所述檢測試劑是通過以下方法制備得到的：用基因工程方法克隆表達EV71?VP1(為公知方法，在此不再贅述)，并用公知方法純化，辣根過氧化酶(HRP)標記，滴定工作濃度(10^-5～10^-7)。