[發明專利]一種低分子量淀粉樣肽寡聚體的人工體外制備方法和用途

無效

• 申請號: 201010264251.2
• 申請日: 2010-08-26
• 公開（公告）號: CN101948523A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 張瑩;洪濤;彭向雷
• 申請（專利權）人: 北京交通大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/70;A61K38/17;A61P25/28;G01N33/53;G01N30/00;G01N23/22
• 代理公司: 北京市商泰律師事務所 11255
• 代理人: 毛燕生

1.一種低分子量淀粉樣肽寡聚體的人工體外制備方法，其特征是將Aβ多肽的單體用無水二甲基亞砜溶解后，于4℃置于緩沖體系中反應22～26小時，使其自然聚合形成寡聚體；所述緩沖體系組成是：NaCl?125mmol/L，KCl?3.3mmol/L，KH₂PO₄?1.2mmol/L，NaHCO₃?26mmol/L，CaCl2?2.5mmol/L，MgSO4?2.4mmol/L，葡萄糖5mmol/L，氨基酸0.3g/L。

2.權利要求1所述的方法，所述Aβ多肽的單體是用基因重組的方法得到淀粉樣肽單體。

3.權利要求1所述的方法，反應時間為24小時。

4.權利要求1或2所述的方法，所得的寡聚體是在透射電鏡下觀察直徑100nm以下的球形顆粒物，分子量為16～40kD。

5.一種基因重組制備Aβ多肽的單體的方法，在N端加組氨酸標簽組6×His，C端加終止子序列TGA，構建Aβ42單體表達載體，在大腸桿菌表達體系內表達，用Ni柱純化目的多肽；然后于室溫下將Aβ42單體溶于冰預冷1～2h的六氟異丙醇，通過送風揮發，完全除去六氟異丙醇，形成肽膜。

6.一種人工腦脊液，其組成是：NaCl?125mmol/L，KCl?3.3mmol/L，KH₂PO₄?1.2mmol/L，NaHCO₃?26mmol/L，CaCl2?2.5mmol/L，MgSO4?2.4mmol/L，葡萄糖5mmol/L，氨基酸0.3g/L。

7.權利要求1所得到的低分子量淀粉樣肽寡聚體在制備診斷、預防和治療阿爾茨海默病的藥物、試劑中的應用。

8.權利要求7所述的應用，其特征是將權利要求1所得到的低分子量淀粉樣肽寡聚體作為標準品，分別利用酶聯免疫吸附試驗、Western?blot實驗、透射電鏡或CD實驗方法，分別制備檢測阿爾茨海默病的試劑。