[發明專利]一種水霉拮抗菌及其應用

無效

• 申請號: 201010264180.6
• 申請日: 2010-08-24
• 公開（公告）號: CN101985605A
• 公開（公告）日: 2011-03-16
• 發明（設計）人: 劉麗玲;曹海鵬;呂利群
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K35/74;A61P31/10;C12R1/07
• 代理公司: 上海智力專利商標事務所 31105
• 代理人: 瞿承達;羅芳英

技術領域

本發明涉及一種芽孢桿菌，尤其涉及一種對魚類水霉病有拮抗作用的芽孢桿菌，以及其作為生物安全用藥的應用。

背景技術

水霉病(Saprolegniasis)是水產養殖中一類由水霉(Saprolegnia)或棉霉(Achlya)引起的寄生性疾病的統稱。目前引起水產動物水霉病的最常見病原是水霉，傳統上水霉病被認為是魚類真菌病的一種。由于水霉比真菌要低等，分類學上，已將此綱生物從原真菌界劃分為茸鞭生物界，故目前也認為水霉屬卵菌綱。包括草魚等四大家魚在內的淡水魚的魚卵、魚苗、成魚都有可能得水霉病，一旦發生很難治療。在晚冬和早春，水溫15℃-20℃時發病最為嚴重。水霉菌包括有性和無性生長周期。研究表明水霉菌的無性生長周期是主要的感染階段。水霉菌無性繁殖產生的孢子黏附到魚的頭部和魚鰭上等表皮組織，也可以擴散至全身。水霉菌既可入侵和破壞魚的皮下組織，造成傷痕和魚的死亡；也可以在魚的表皮生長，形成白色或者灰色的棉花狀菌絲體，影響魚的觀感和價值。

以前能治療水霉病最有效的化學試劑是孔雀石綠(Malachite?Green)。然而，孔雀石綠是很強的致癌物質，我國已禁止使用孔雀石綠來治療食用魚的水霉病感染。國家對水霉病的研究非常重視，在農業部公益性行業科研專項和國家十一五支撐計劃中都支持了水霉病的安全用藥技術及孔雀石綠替代藥物的研發。水霉病的嚴重危害也促使國內外的真菌學家和水產學家對其進行了研究，主要研究內容集中在水霉病的癥狀的描述，病原菌的鑒定，致病條件的探討，以及防治方法的摸索。但是現有的水霉病防治藥物治療效果普遍不夠理想，水霉病的防治問題仍沒有很好的解決方案，見盧彤巖.水產養殖業孔雀石綠替代品研究現狀[J].黑龍江水產，2009，130：22。

在現有化學藥物尚未取得理想防治效果的情況下，我們將目光轉向了微生物來源的藥物的篩選。研究表明，微生物來源的很多活性成分可以抑制真菌的生長和感染，見下列文獻：李海慧，徐風花，夏清梅，等.水稻立枯病拮抗菌株抗病機理研究[J].黑龍江農業科學，2007，(1)：38-40；郝華昆，韓俊華，李為民，等.棉花黃、枯萎病拮抗菌株B110的鑒定及其抑菌作用方式[J].植物保護，2007，33(2)：77-80；宋國彪，劉紅彥，王振躍，等.拮抗菌96-79抑菌物質的理化特性研究[J].江西農業學報，2008，20(3)：40-42。生物藥物通常具有無公害、無環境污染和防治作用專一性等優點，目前科學界公認生物防治將在健康養殖中發揮越來越大的作用。

在自然環境中往往存在大量的對各種病原菌(包括致病真菌)有拮抗作用的菌株。在追求可持續性發展的今天，利用拮抗菌防治病害是十分活躍的研究領域之一，特別是多種芽孢桿菌已被報道可作為植物病害的生防細菌，比如用于防治水稻真菌病稻瘟病的就有枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、短小芽孢桿菌(B.pumilis)和蠟狀芽孢桿菌(B.cereus)等(見李永剛，宋興舜，馬鳳鳴，等.水稻稻瘟病拮抗菌L1鑒定及抑菌特性的初步研究[J].微生物學通報，2008，35(6)：898-902)。

近年來芽孢桿菌作為益生菌在水產養殖中的應用范圍不斷擴大。已知芽孢桿菌的作用機制主要包括：抑制有害細菌的生長，維持腸道微生態平衡，改善養殖水體的水質，提高飼料利用率，促進動物生長等。起到拮抗作用的細菌分泌物是很復雜的，包括細菌素、小分子量的抗菌素、過氧化物、各種酶及許多次生代謝產物等。但此前報道的有拮抗真菌活性的多種芽孢桿菌的拮抗物質被證實具有蛋白質性質(見李永剛，郝中娜，楊明秀，等.寒地水稻病害生防菌株L1的鑒定及抑菌機理研究[J].東北農業大學學報，2008，39(7)：9-12)，由于蛋白質熱穩定性不好及易受環境中蛋白酶的降解，不利于制藥企業大規模純化其活性成分用于生產實踐。

發明內容

本發明要提供一種新型的拮抗菌，其活性成分穩定性高，可作為孔雀石綠替代藥物的生物藥源，降低環境污染，滿足魚類水霉病生物防治的需要。

本發明的目的可以通過以下技術方案實現：

提供一種水霉拮抗菌Sh1，屬于解淀粉芽孢桿菌(Bacillus?amyloliquefaciens)，該菌種已于2010年6月2日在中國專利局指定的保藏單位，武漢，中國典型培養物保藏中心進行保臧，保藏號CCTCC?NO：M?2010129。

本發明還提供所述的保藏號為CCTCC?NO：M?2010129的水霉拮抗菌Sh1，在防治魚類水霉病中的應用；尤其是在草魚水霉病防治中的應用。