[發明專利]一種提純鷹嘴豆芽素A的方法

無效

• 申請號: 201010263082.0
• 申請日: 2010-08-26
• 公開（公告）號: CN102373248A
• 公開（公告）日: 2012-03-14
• 發明（設計）人: 李法慶;郭琴;劉東鋒
• 申請（專利權）人: 蘇州寶澤堂醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12P17/06
• 分類號: C12P17/06;C07D311/36;C07D311/40
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技術領域：

本發明涉及天然藥物領域，具體涉及一種提純鷹嘴豆芽素A的方法。

背景技術：

鷹嘴豆芽素A，又名生原禪寧A，雞斗黃素A，英文名稱為BiochaninA；分子式：C₁₆H₁₂O₅；分子量：284.26；分子結構式如下圖，主要存在于紅車軸草、鷹嘴豆等豆科草本植物中。

目前對鷹嘴豆芽素A的藥理研究主要集中在其抗腫瘤和抗氧化等方面。林長樂等實驗發現鷹嘴豆芽素A在其實驗設定的濃度下均能減少由HIV-1介導的細胞融合數(EC₅₀＝5.1μmol·L^-1，SI＝39)及p24抗原的表達量(EC＝38μmol·L^-1，SI＝5.2)。終濃度5、10、25、50μmol·L^-1，d?BioA對CD4⁺淋巴細胞早期活化抗原CD69表達具有明顯抑制作用(P＜0.01)，其中50μmol·L^-1達到最大抑制率，能使活化抑制CD4⁺淋巴細胞早期活化作用。另有報道發現BioA對小鼠T淋巴細胞的活化增殖和周期具有明顯的抑制作用。

目前有關提取鷹嘴豆芽素A的工藝有：

專利(申請號200410013189.4)“一種從紅車軸草制備紅車軸草異黃酮的制備工藝”，該發明采用低碳醇熱回流提取，再用礦酸作水解處理，濃縮加高溫活化硅膠粉或加高溫活化的活性氧化鋁吸附，過濾濃縮洗脫液，干燥即得紅車軸草總異黃酮制備物。該方法柱層析吸附量小，解析率低，且未分離得到各單體異黃酮。

專利(申請號200910229040.2)“鷹嘴豆芽素A的合成方法”，以對甲氧基苯乙腈和間苯三酚作為原料進行縮合，關環，然后經過提純而獲得產物。該方法工藝復雜，得率低，所用原料毒性大，成本高。

目前尚無文獻采用超臨界萃取法提取純化鷹嘴豆芽素A。

超臨界二氧化碳萃取分離過程的原理是利用超臨界二氧化碳對某些特殊天然產物具有特殊溶解作用，利用超臨界二氧化碳的溶解能力與其密度的關系，即利用壓力和對超臨界二氧化碳溶解能力的影響而進行的。在超臨界狀態下，將超臨界二氧化碳與待分離的物質接觸，使其有選擇性地把極性大小、沸點高低和分子量大小的成分依次萃取出來。當然，對應各壓力范圍所得到的萃取物不可能是單一的，但可以控制條件得到最佳比例的混合成分，然后借助減壓、升溫的方法使超臨界流體變成普通氣體，被萃取物質則完全或基本析出，從而達到分離提純的目的。是現有比較環保的提取方法。

發明內容：

本發明的目的在于克服鷹嘴豆芽素A現有制備技術中存在的缺陷，提供了一種提純鷹嘴豆芽素A的方法。該方法包括如下步驟：

(1)將原料粉碎至50-100目，用pH4-6的酸水拌濕，加入生物酶于35-40℃保溫酶解，得酶解物料；

(2)將酶解物料加乙醇熱回流提取，提取2-3次，提取液回收乙醇，得粗提物；

(3)將粗提物投入到超臨界CO₂萃取釜中，再注入夾帶劑，通入CO₂，在萃取壓力為20-55MPa，溫度為30-55℃條件下進行萃取，經過1-2小時萃取后，收集萃取物，揮干溶劑，得粗提物。

(4)將萃取所得粗提物用無水乙醇溶解，再與100-200目的聚酰胺混合拌樣，揮干乙醇，得上樣樣品，裝入預處理好的聚酰胺柱層析，用石油醚-乙酸乙酯(10∶1、9∶1、4∶1)梯度洗脫，TLC檢測，收集鷹嘴豆芽素A流分，濃縮結晶，再以丙酮重結晶，得白色結晶粉末，即鷹嘴豆芽素A。

其特征在于步驟(1)所述原料為紅車軸草全草、鷹嘴豆種子或其常規發芽得到的豆芽。

步驟(1)所述酸水溶液可選鹽酸或硫酸；所述生物酶為β-葡聚糖苷酶，酶添加量為1-5‰。

步驟(2)所述乙醇的體積百分比濃度為50-90％，加入量為酶解物料質量的5-10倍。

步驟(3)所述夾帶劑為乙醇、甲醇或丙酮。

步驟(4)所述洗脫條件：洗脫體積為4-8倍柱體積。

本發明具有如下優點：操作簡單，省時，產品得率高，質量好，純度高。

具體實施方式：

實施例1：