[發明專利]一種酸性橙Ⅱ的酶聯免疫檢測試劑盒無效

申請號：	201010262012.3	申請日：	2010-08-25
公開（公告）號：	CN101915831A	公開（公告）日：	2010-12-15
發明（設計）人：	郗日沫;薛虎寅;孟萌;張太昌;張元陽;徐靜;王亞賓	申請（專利權）人：	南開大學
主分類號：	G01N33/543	分類號：	G01N33/543;G01N33/535
代理公司：	天津佳盟知識產權代理有限公司 12002	代理人：	侯力
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種酸性免疫檢測試劑盒
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【說明書】：

【技術領域】

本發明屬于酶聯免疫吸附分析技術領域，涉及一種酶聯免疫檢測試劑盒，尤其涉及一種酸性橙Ⅱ的酶聯免疫檢測試劑盒。

【背景技術】

偶氮類染料(azo?dye)是一種重要的合成染料，是紡織品服裝在印染工藝中應用最廣泛的一類合成染料，用于多種天然和合成纖維的染色和印花，也用于油漆、塑料、橡膠等的著色。偶氮染料本身無任何直接的致癌作用，但是在體內還原分解，可形成芳香胺化合物，芳香胺在體內經過代謝活動后與靶細胞作用可能使DNA發生變化，成為人體病變的誘發因素，對人體或動物有潛在的致癌性和致突變性。由于其致癌性和致突變性，世界上很多國家都對偶氮類染料的使用實施了嚴格的規定。日本曾批準使用的合成色素有27種，現已禁止使用其中的16種。美國1960年允許使用的合成色素有35種，現僅剩下7種。瑞典、芬蘭、挪威、印度、丹麥、法國等早已禁止使用偶氮類色素，其中挪威等一些國家還完全禁止使用任何化學合成色素。此外還有一些國家已禁止在肉類、魚類及其加工品、水果及其制品、調味品、嬰兒食品、糕點等食品中添加合成色素。我國對在食品中添加合成色素也有嚴格的限制：凡是肉類及其加工品、魚類及其加工品、醋、醬油、腐乳等調味品、水果及其制品、乳類及乳制品、嬰兒食品、餅干、糕點都不能使用人工合成色素。只有汽水、冷飲食品、糖果、配制酒和果汁露可以少量使用，一般不得超過1/10000。目前我國批準使用的食用合成色素有9個品種，即莧菜紅、誘惑紅、胭脂紅、新紅、酸性紅、檸檬黃、日落黃、靛藍和亮藍。酸性橙Ⅱ是一類合成型偶氮染料，廣泛用于紡織印染、皮革、造紙、橡膠、塑料、涂料、化妝品、木材加工等，在我國禁止被用作食品添加劑。但是由于酸性橙Ⅱ色澤鮮艷、著色穩定、價格低廉等特點，一些不法商販為了牟取暴利將其作為食用色素用于食品生產與加工。我國市售和出口海外的蜜餞、豆制品、鹵制品、辣椒面、紅殼瓜子等均被檢出過含有酸性橙Ⅱ等類似合成非食用色素，嚴重危害了消費者的身體健康，并且常常導致出口食品被迫就地銷毀。所以，酸性橙Ⅱ檢測方法的開發研究已刻不容緩。

在偶氮類色素的檢測中，儀器法如高效液相色譜以及液相-質譜聯用是應用最廣泛的方法。這些方法準確，穩定，可靠，可以作為標準方法。但儀器法價格昂貴，費時較長，需要大型儀器設備，需要專門的技術人員，所以難以用于現場操作。

酶聯免疫檢測法(ELISA)提供了一種極好的掃描手段。該法具有快速，準確，簡易，不需要專門人員操作等優點，這使得ELISA法成為一種理想的，可用于常規掃描的檢測方法，因此建立一種有效的ELISA法檢測酸性橙Ⅱ的方法具有重要意義。

【發明內容】

本發明目的是克服現有技術存在的上述不足，提供一種酸性橙Ⅱ的酶聯免疫檢測試劑盒。

本發明提供的酸性橙Ⅱ酶聯免疫檢測試劑盒中試劑的組成包括：

A、各孔包被有包被抗原即酸性橙Ⅱ與載體蛋白的偶聯物的酶標板1塊；

B、酸性橙Ⅱ標準溶液：0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL各1瓶；

C、酶標羊抗兔抗體溶液：辣根過氧化酶-羊抗兔IgG原液，使用時用洗滌溶液稀釋成1∶2000的工作濃度；

D、酸性橙Ⅱ抗體溶液：人工免疫抗原免疫動物制備所得的多克隆抗體原液，使用時用洗滌溶液稀釋成1∶40000工作濃度；

E、發光溶液：使用400ul?TMB溶液、10ml?pH＝5.0的檸檬酸緩沖液和2ul?30％的H₂O₂溶液混合而成，其中TMB溶液由10mgTMB+2ml?DMSO混合而成；

F、洗滌溶液：為pH＝7.5、濃度為0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液，其中含有吐溫-20體積分數0.05％；所述的磷酸鹽用磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀配制。

G、包被溶液：1.59g碳酸鈉和2.53g碳酸氫鈉溶于1L水中制成的溶液，調節pH＝9.5；