[發明專利]一種用于不同亞型非小細胞肺癌分型的核酸適體及其篩選方法

有效

• 申請號: 201010261704.6
• 申請日: 2009-04-28
• 公開（公告）號: CN101914543A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 方曉紅;趙子龍;徐麗;上官棣華;譚蔚泓
• 申請（專利權）人: 中國科學院化學研究所
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N15/10;C12Q1/68;C12Q1/02;G01N15/10;G01N21/64
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本申請是申請號為200910083075.X、申請日為2009年04月28日、發明創造名稱為“用于不同亞型非小細胞肺癌分型的核酸適體及其篩選方法”的分案申請。

技術領域

本發明涉及一種用于不同亞型非小細胞肺癌分型的核酸適體及其篩選方法。

背景技術

肺癌是最致命的癌癥之一，在組織學上分為小細胞肺癌和非小細胞肺癌，其中后者占肺癌病例的80％。非小細胞肺癌又分為腺癌，鱗癌和大細胞癌三類亞型。腺癌作為一種最主要的亞型，占非小細胞肺癌的40％。非小細胞肺癌的預后嚴重依賴于確診時疾病所處的分期，按照現有的治療水平，病人的5年生存率從I期的60％降到IV期的1％。盡管在肺癌的檢測方法上取得了較大進展，但目前仍有約70％的病人在確診時已處于肺癌晚期。對非小細胞肺癌不同亞型的治療施加相似的治療方法而沒有考慮亞型之間的異質性是影響非小細胞肺癌治療效果的重要原因。盡管目前神經元特異性烯醇化酶、細胞角蛋白片段21-1、癌胚抗原、糖類抗原等腫瘤標志物用于肺癌的檢測和術后評估，但是這些腫瘤標志物對肺癌，尤其是不同肺癌亞型的特異性和敏感性不夠。非小細胞肺癌的分型和診斷仍主要依靠細胞物理形態進行判斷，發展能從分子水平上反映非小細胞肺癌特征的新試劑，并用以進行亞型分類和早期診斷是降低非小細胞肺癌死亡率重要手段。

核酸適體(Aptamer，又稱適配體，適配子)是能高親和性、高特異性的結合某種生物靶標的單鏈寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。已報道核酸適體的靶標包括金屬離子、有機小分子、多肽、蛋白質、細胞甚至組織等。核酸適體的分子識別功能與抗體類似，但與抗體相比具有很多優良的特性，如無免疫原性、容易合成與標記、快速的穿透組織、良好的代謝動力學、不同批次之間產品不會存在差異和具有很好化學穩定性，在生物檢測、疾病診斷治療等領域具有重要的應用前景。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于不同亞型非小細胞肺癌分型的核酸適體及其篩選方法。

本發明提供的核酸適體，是含有序列表的序列1至序列9中任一所示的核苷酸的DNA片段。

所述核酸適體具體可為序列表的序列1至序列16中任一所示的DNA片段。

核酸適體1：5’-CGCGCGCG-3’；見序列表的序列10；其中加粗下劃線標記的為目標序列，見序列表的序列1；

核酸適體2：5’--3’；見序列表的序列2；

核酸適體3a：5’-ATGCCACGTGGCAT-3’；見序列表的序列11；其中加粗下劃線標記的為目標序列，見序列表的序列3；

核酸適體3b：5’-TCGGATGCGCATCCGA-3’；見序列表的序列12；其中加粗下劃線標記的為目標序列，見序列表的序列4；

核酸適體3c：5’-CCACTACGTAGTGG?-3’；見序列表的序列13；其中加粗下劃線標記的為目標序列，見序列表的序列5；

核酸適體3d：5’-GATCGATC-3’；見序列表的序列14；其中加粗下劃線標記的為目標序列，見序列表的序列6；

核酸適體3e：5’-CGAACATGTTCG-3’；見序列表的序列15；其中加粗下劃線標記的為目標序列，見序列表的序列7；

核酸適體3f：5’-GATTAATTAATC-3’；見序列表的序列16；其中加粗下劃線標記的為目標序列，見序列表的序列8；

核酸適體4：5’--3’；見序列表的序列9。

其中，每條DNA序列中目標序列以外的核苷酸可用其它互補的核苷酸代替。

其中，核酸適體3a、核酸適體3b、核酸適體3c、核酸適體3d、核酸適體3e和核酸適體3f，包含一保守序列G₁T₁GGGTGGGG₂GGGT₂G₃GA。其中G₁可以刪除，T₁可被核苷酸A取代，G₂可以被核苷酸C或TT取代，T₂可以被核苷酸A取代，G₃可以被核苷酸A取代或刪除。

還可將所述核酸適體進行修飾或改造，得到所述核酸適體的衍生物，所述核酸適體的衍生物可為：

a)將所述核酸適體刪除部分或增加部分互補的核苷酸，得到的與所述核酸適體具有相同功能的核酸適體的衍生物。

b)將所述核酸適體進行核苷酸取代或部分修飾，得到的與所述核酸適體具有相同功能的核酸適體的衍生物。

c)將所述核酸適體的骨架改造為硫代磷酸酯骨架，得到的與所述核酸適體具有相同功能的核酸適體的衍生物。