[發明專利]表達CIVPS或內含肽修飾蛋白的轉基因植物及其制備方法

在審

• 申請號: 201010261396.7
• 申請日: 2003-01-07
• 公開（公告）號: CN101993890A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發明（設計）人: 邁克爾·R·拉爾布
• 申請（專利權）人: 邁克爾·R·拉爾布
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00;A01H4/00
• 代理公司: 北京金信立方知識產權代理有限公司 11225
• 代理人: 黃威

1.一種生產轉基因植物的方法，該方法包括：

提供在轉基因植物中表達修飾蛋白的重組DNA的表達構建體，該表達構建體包括編碼修飾蛋白的序列，該修飾蛋白具有靶蛋白和融合在該靶蛋白內的內含肽，其中所述的內含肽可誘導引起給修飾蛋白的順式剪接；

用該表達構建體轉化植物、植物部分、幼苗、組織、細胞、種子、芽苗或原生質體；以及

從轉化的植物、植物部分、幼苗、組織、細胞、種子、芽苗或原生質體中再生轉基因植物。

2.根據權利要求1所述的方法，該表達構建體金言包括一或多個核苷酸序列，該核苷酸編碼至少一個可選擇的標記、報道基因和啟動子。

3.根據權利要求2所述的方法，其中：

至少一個可選擇標記具有對溴苯腈、2，2-二氯丙酸、G418、草甘膦、吡氟氯禾靈、潮霉素、咪唑啉、卡那霉素、甲氨蝶呤、新霉素、草胺膦、稀禾定、單端孢霉烯、磺脲、s-三嗪、甘露醇和/或三氮嘧啶中一種或多種化學物質的抗性；以及

啟動子先于編碼修飾蛋白的序列。

4.根據權利要求3所述的方法，其中轉基因植物對一種或多種化學物質的常規劇毒性有耐受性或抗性。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述的內含肽選自酵母屬真菌、Psp?pol內含肽、源于結核桿菌的內含肽和源于Thermococcuslitoralis的內含肽。

6.根據權利要求1所述的方法，其中所述的內含肽選自源于適溫生物的內含肽。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述的內含肽選自Tersnf2、Ter?RIR1-4、Rma?dnaB、Tfus?recA-1、Tfus?recA-2、Aae?RIR2、Tth?RIR1-1、Tth?RIR1-2、Tth?DnaE-1、MexHelic、Chy?RIR1、Gob?DnaE、BspM1918?RIR1、Tvo?VMA、MkaCDC48、Mka?rtcB、Mka?VatB、Mka?RFC、Tfu?pol-2、Tag?pol-1、Psp?pol-1、Pfu?topA、Pfu?IF2、Pfu?CDC21、Pfu?lon、Pho?pol、Pho?rtcB(PH1602)、Pho?CDC21-1、Pho?r-gyr、Pholon、Pho?VMA、Pab?polC、Pab?rtcB(PAB0383)、Pab?IF2PabRIR1-1、Pab?RIR1-2、Pab?RIR1-3、Pab?CDC21-1、Pab?CDC21-2、Pab?RFC-1、Pab?lon、Pab?VMA、Pab?klbA、Pab?moaA、Mja?pol-1、Mja?pol-2、Mja?hyp1(MJ0043)、Mja?rtcB(MJ0682)、Mja?helicase(MJ1124)、Mja?GF6P、Mja?RNR-1、Mja?RFC-1、Mja?RFC-2、Mja?RpolA’、Mja?RpolA″、MjaTFIIB、Mja?r-gyr和AApe?hyp3(APE0745)。

8.根據權利要求1所述的方法，其中所述的內含肽是熱誘導的。

9.根據權利要求1-8任一權利要求所述的方法，其中所述的靶蛋白選自木質纖維素降解蛋白、源自微生物的木質纖維素降解蛋白、E.C.3.2.1.4等級的纖維素酶、E.C.3.2.1.91等級的外切纖維二糖水解酶、E.C.3.2.1.21等級的葡糖苷酶、內切纖維素酶、外切纖維素酶、木聚糖酶、半纖維素酶、木質酶、木質素過氧化物酶和纖維素酶。

10.根據權利要求1-8中任一權利要求所述的方法，其中所述的靶蛋白為改變至少一種物質水平的蛋白，該物質選自葡萄糖、果糖、甘油、甘氨酸三甲內鹽、果膠、蔗糖、乳糖、麥芽糖、半乳糖、一種或多種氨甲酸、一種或多種脂、一種或多種維生素和/或淀粉。

11.根據權利要求1-8中任一權利要求所述的方法，其中所述的靶蛋白為改變至少一種物質活性的蛋白，該物質選自蛋白質、RNA和脂質。

12.根據權利要求1-8中任一權利要求所述的方法，其中所述的靶蛋白選自蘇云金芽孢桿菌內毒素、Phytolacca?insularis蛋白、病毒Y蛋白、雙粒病毒組蛋白、黃瓜花葉病毒2b蛋白和黃瓜花葉病毒蛋白。