[發明專利]一種抗重金屬汞離子抗體及其應用

有效

• 申請號: 201010261327.6
• 申請日: 2010-08-24
• 公開（公告）號: CN101948807A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 趙麗;李霞;楊慧
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種抗重金屬汞離子抗體及其應用。

背景技術

近年來，重金屬污染事件層出不窮、愈演愈烈，人類賴以生存的空氣、土壤、蔬菜和動物均受到了重金屬等毒物的污染。環境污染和飼料藥物添加劑的濫用，造成畜禽產品重金屬殘留不同程度超標(逄瑞玥.我國畜禽產品質量安全存在的問題及應對策略.黑龍江糧食，2007，(4)：20-22)。作物中積累的重金屬離子通過食物鏈的生物放大作用進入人畜體內，威脅人畜健康(郎明林，張玉秀，柴團耀.基因工程改良植物重金屬抗性與富集能力的研究進展.生物工程學報，2004，20(2)：157-164)。汞是蓄積作用較強的元素，主要在動物體內蓄積。湖泊、沼澤中的水生植物、水產品易蓄積大量的汞。后期，農業上使用含汞殺螨劑以來，汞對土壤、自然水系和大氣的污染日益嚴重。汞污染在世界的某些地方，已成為大眾健康的公害(梅光泉.重金屬廢水的危害及治理.微量元素與健康研究，2004，21(4)：54-56)。快速靈敏地檢測食物中的重金屬含量是保障食品安全的基礎，傳統檢測重金屬殘留的分析方法包括原子吸收光譜分析(Atomic?Absorption?Spectroscopy，AAS)和電感耦合等離子發射光譜(Inductively?Coupled?Plasma?Atomic?Emission?Spectroscopy，ICP-AES)等是靈敏、可靠的(Bontidean?I，Lloyd?JR，Hobman?JL，et?al.Bacterial?metal-resistance?proteins?and?their?use?in?biosensors?for?the?detection?of?bioavailable?heavy?metals.J?Inorg?Biochemy，2000，79(1-4)：225-229.)。但昂貴的儀器、專業的分析人員及復雜的樣品前處理限制了這些方法的應用。檢測必須在具備大型分析儀器的重點實驗室內進行，無法用于現場檢測，而且受到費用高、處理量有限和檢測時間長等限制(劉功良，王菊芳.重金屬離子的免疫檢測研究進展.生物工程學報，2006，22(6)：877-881)。傳統的重金屬檢測方法不適合蔬菜、水果等保鮮期短、利潤低和需大通量檢測的樣品。

對重金屬的常規性檢測方法已經有很多種，有些也已經是非常成熟的技術，但因為重金屬離子存在的范圍很廣，根據檢測精度、方便程度和檢測成本，每種技術都有它們的局限性，同時還需合適的場所，因此都不利于在生產中推廣應用。建立更快速、更經濟的免疫分析法檢測汞離子是生產及經濟發展的需要。

發明內容

本發明的目的是提供一種抗重金屬汞離子抗體及其應用

本發明提供的抗重金屬汞離子抗體為雜交瘤細胞株H2H5?CCTCC?№.C200948分泌的單克隆抗體。

雜交瘤細胞株H2H5?CCTCC?№.C200948也屬于本發明保護的范圍，已于2009年7月8日保藏于中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC，地址為：湖北省武漢市武漢大學)，保藏登記號為CCTCC?№.C200948。

雜交瘤細胞株H2H5?CCTCC?№.C200948或其分泌的單克隆抗體在汞離子免疫檢測中的應用也屬于本發明的保護范圍。

本發明提供的雜交瘤細胞株H2H5?CCTCC?№.C200948分泌的單克隆抗體為特異性單克隆抗體。其制備過程因Hg²⁺離子太小以至于不能引起免疫反應，所以用螯合劑(二乙烯三胺五乙酸，DTPA)將金屬離子與載體蛋白(匙孔血藍蛋白，KLH)連接起來。成功合成、鑒定汞復合物抗原后，免疫BALB/c小鼠，通過細胞融合獲得了穩定分泌抗體的雜交瘤細胞。用極限稀釋法亞克隆，通過ELISA篩選，最終獲得了穩定分泌抗汞離子抗體的細胞株(H2H5)。小鼠腹腔注射1×10⁷H2H5細胞株制備腹水，腹水抗體效價在1∶51200以上。經鑒定雜交瘤為IgG1亞類，輕鏈為kappa型且分泌抗體穩定性較好。雜交瘤細胞株H2H5?CCTCC?№.C200948分泌的單克隆抗體為汞離子殘留免疫學檢測方法的建立提供了技術基礎，對提高風險評估工作的效率和質量，保障食品安全有重要現實意義。

本發明的金屬汞離子螯合物的單克隆抗體的獲得，為汞離子殘留免疫學檢測方法的建立打下了基礎。可以利用上述單克隆抗體，研究和建立重金屬的免疫學檢測方法。并利用其快速、廉價、靈敏和特異性強的優點，發展便于現場檢測的便攜方法，從而適用于農畜產品的抽樣檢測及進出口通關的快速檢驗。對提高風險評估工作的效率和質量，保障食品安全有重要現實意義。

附圖說明