[發明專利]鉛離子抗原及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201010259874.0
• 申請日: 2010-08-20
• 公開（公告）號: CN101935348A
• 公開（公告）日: 2011-01-05
• 發明（設計）人: 王保民;曹振;趙洪偉;南鐵貴;高巍;譚桂玉;王敏;孫碩;李召虎
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44;G01N33/566
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種制備鉛離子抗原的方法，包括如下步驟：

1)將螯合劑溶解于酸的水溶液中，再向其中加入亞硝酸鹽水溶液，進行重氮化反應，得到重氮化的螯合劑；

2)將步驟1)得到的重氮化的螯合劑和載體蛋白溶液混合，進行偶聯反應，得到所述螯合劑與載體蛋白的偶聯物；

3)將步驟2)得到的所述螯合劑與載體蛋白的偶聯物與鉛離子的溶液混合，進行絡合反應，得到螯合劑與載體蛋白的偶聯物與鉛離子形成的絡合物，即得到鉛離子抗原。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

步驟1)中，所述螯合劑、所述酸和所述亞硝酸鹽的投料配比為2.5mg∶2.5×10^-4mol∶0.7×10^-5mol；

步驟2)中，所述重氮化螯合劑和所述載體蛋白的投料摩爾比為12∶1；

步驟3)中，所述偶聯物與所述鉛離子的投料摩爾比為1∶12。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步驟1)中，所述重氮化反應的條件為：反應溫度為0℃，避光，反應時間為15min；

步驟2)中，所述偶聯反應的條件為：反應溫度為4℃，PH為7.5，避光，反應時間為8h；

在步驟3)中，所述絡合反應的條件為：反應溫度為25℃，pH值為7.5，反應時間為12h。

4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

步驟1)中，所述螯合劑為對氨基芐基乙二胺四乙酸；所述亞硝酸鹽水溶液中的亞硝酸鹽為亞硝酸鈉，所述酸的水溶液中的酸為鹽酸、硫酸、硝酸或硼酸；

在步驟2)中，所述載體蛋白溶液按照如下方法制備：將載體蛋白溶解到緩沖液中得到所述載體蛋白溶液；所述緩沖液為碳酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液或4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液，所述緩沖液的pH值為9.6；所述載體蛋白為牛血清白蛋白或卵清白蛋白；

在步驟3)中，所述鉛離子的溶液為硝酸鉛水溶液。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟3)中，所述絡合反應后，包括將絡合反應產物進行透析得到鉛離子抗原的步驟。

6.由權利要求1-5中任一所述方法制備得到的鉛離子抗原。

7.一種鉛離子抗原，是重氮化的螯合劑與載體蛋白通過共價鍵連接形成的偶聯物再與鉛離子通過配位鍵連接形成的絡合物；所述重氮化的螯合劑的結構式如下：

；所述載體蛋白為牛血清白蛋白或卵清白蛋白。

8.由權利要求6或7所述鉛離子抗原制備得到的抗體。

9.權利要求6或7所述鉛離子抗原和/或權利要求8中所述抗體在檢測樣品中鉛離子中的應用；

權利要求6或7所述鉛離子抗原和/或權利要求8中所述抗體在制備用于檢測樣品中鉛離子的酶聯免疫試劑盒中的應用；

權利要求6或7所述鉛離子抗原和/或權利要求8中所述抗體在制備用于檢測樣品中鉛離子的發光免疫試劑盒中的應用；

權利要求6或7所述鉛離子抗原和/或權利要求8中所述抗體在制備用于檢測樣品中鉛離子的免疫親和色譜柱中的應用；

所述樣品為水體、食品或土壤。