[發明專利]一種新型紅細胞代用品-人工紅細胞熒光納米粒的制備方法

無效

• 申請號: 201010259345.0
• 申請日: 2010-08-23
• 公開（公告）號: CN102370993A
• 公開（公告）日: 2012-03-14
• 發明（設計）人: 谷勁松;王革;葉春江
• 申請（專利權）人: 王革;谷勁松;葉春江
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61K47/42;A61K47/34;A61K38/42;A61P7/08
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1.一種通過戊二醛交聯及聚乳酸、聚乙二醇共聚物(PLA-PEG)納米粒包埋牛血紅蛋白與過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)以及碳酸酐酶(CA)交聯生成PolyHb-SOD-CAT-CA復合體，以制備一種具有治療意義人工紅細胞納米粒的方法。

2.如權利要求1所述PolyHb-SOD-CAT-CA復合體，其特征在于：

(1)通過戊二醛交聯牛血紅蛋白與過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)以及碳酸酐酶(CA)生成；

(2)過氧化氫酶∶超氧化物歧化酶∶碳酸酐酶∶血紅蛋白的比例為300,000U∶15,000U∶100U∶1g；

(3)PolyHb-SOD-CAT能在較大程度上消除了氧自由基及過氧化物，另外，它還能抑制聚合血紅蛋白制備過程中高鐵血紅蛋白的形成，不僅在血液替換時能預防缺血再灌注損傷(I/R-I)的發生，還有潛力成為I/R-I治療劑，以治療其他原因造成的I/R-I；

(4)交聯的碳酸酐酶(CA)對碳酸和重碳酸離子起到迅速轉換的作用，在血液中維持酸堿平衡，并幫助排除二氧化碳。

3.如權利要求1所述戊二醛交聯反應，其特征在于：

(1)戊二醛與血紅蛋白摩爾比為17∶1；

(2)交聯反應操作過程在4℃，通氮氣保護環境下進行；

(3)交聯反應前賴氨酸與血紅蛋白摩爾比為10∶1。

4.如權利要求1所述聚乳酸、聚乙二醇共聚物(PLA-PEG)，其特征在于：

(1)PLA-PEG共聚物可溶于丙酮；

(2)PLA-PEG制備采用的DL一聚乳酸分子量為6,000-16,000；

(3)PLA-PEG制備采用的甲氧基聚乙二醇分子量為2,000-5,000；

(4)PLA-PEG制備采用2一乙基己酸亞錫催化反應。

5.如權利要求1所述人工紅細胞納米粒，其特征在于：

(1)人工紅細胞納米粒包埋材料由PLA-PEG共聚物與氫化的大豆卵磷脂混合反應生成；

(2)人工紅細胞納米粒包埋材料采用0.05％香豆素-6作為熒光標記物；

(3)人工紅細胞納米粒制備整個操作過程在4℃和氮氣保護下完成；

(4)納米粒包埋PolyHb-SOD-CAT-CA增加了該復合體的穩定性，延長其體內半衰期。

6.如權利要求1所述牛血紅蛋白，其特征在于：

(1)通過低滲溶牛血紅細胞制備得到；

(2)牛血紅蛋白制備步驟包括：甲苯抽提、高速離心凈化、離子交換層析；

(3)牛血紅蛋白制備采用低滲溶液為12.5mM、pH?7.4的磷酸鉀緩沖液；

(4)牛血紅蛋白制備整個操作過程在4℃和氮氣保護下完成；

(5)牛血紅蛋白比人血紅蛋白更穩定，而且不需要2，3-二磷酸甘油酸(2，3-DPG)來調節載氧能力，聚合后其值P₅₀接近天然血紅蛋白；

(6)交聯后牛血紅蛋白基本無免疫原性。