[發明專利]一種極小類胚胎樣干細胞的制備方法有效
| 申請號： | 201010259151.0 | 申請日： | 2010-08-23 |
| 公開（公告）號： | CN102373176A | 公開（公告）日： | 2012-03-14 |
| 發明（設計）人： | 楊躍進;徐輝;錢海燕 | 申請（專利權）人： | 楊躍進;徐輝;錢海燕 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775 |
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| 地址： | 100037 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 極小 胚胎 干細胞 制備 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種極小類胚胎樣干細胞的制備方法，其特征在于采用全骨髓培養法，以多次更換培養液的方式逐步去除未貼壁的細胞，細胞呈明顯克隆樣生長后，酶解使其重新懸浮，流式細胞儀富集sca-1(+)、lineage(-)及CD45(-)的亞群細胞，即得極小類胚胎樣干細胞。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于全骨髓培養法的培養時間為5-6天，更換培養液的次數為3次。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于全骨髓培養法的培養時間為5-6天，培養液的更換次數為3次，第1次為24小時，以后每隔兩天清洗一次。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在該方法的具體步驟如下：
a.取出全骨髓細胞接種到塑料培養瓶中，置于37℃、含5％CO2的潮濕培養箱中培養；
b.接種后24小時初次更換培養液，去除非貼壁細胞，之后每兩天更換一次培養液，共計更換3次；
c.全骨髓細胞培養5天，細胞呈明顯克隆樣生長后，加入0.25％胰酶-0.02％EDTA液使所有細胞重新懸浮；
d.將細胞懸液加至熒光素標記抗體稀釋液混勻，避光，置冰上孵育30min；
e.清洗未結合的抗體，離心，重復兩次，然后重新懸浮；
f.以流式細胞儀分選sca-1(+)/lin(-)/CD45(-)亞群細胞，即極小類胚胎樣干細胞。
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