[發明專利]一種固體發酵生產γ-多聚谷氨酸的細菌YXY-C1及其產品

有效

• 申請號: 201010258517.2
• 申請日: 2010-08-20
• 公開（公告）號: CN101948769A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 沈其榮;雍曉雨;楊興明;尹成紅;徐陽春;冉煒
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P13/00;C08G69/46;C09K17/18;G01N35/00;G01N27/447;C12R1/07
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

1.一種固體發酵生產γ-多聚谷氨酸的細菌YXY-C1，屬于死谷芽孢桿菌(Bacillusvallismortis)，2009年11月30日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC?NO.3478，主要生物學特性為：革蘭氏染色陽性G⁺，細胞形狀為桿狀，芽孢中生，過氧化氫酶陽性、淀粉水解陽性、V.P.反應陽性、纖維素分解陰性、明膠水解陽性、硝酸鹽還原陽性、吲哚試驗陽性，能利用檸檬酸鹽，發酵葡萄糖、木糖、蔗糖產酸產氣。

2.用權利要求1所述的細菌YXY-C1固體發酵生產γ-多聚谷氨酸的方法，包括：以牛糞和味精粕為主要原料，添加輔料：麩皮、玉米粉、豆粕、檸檬酸、MgS0₄·7H₂0和MnS0₄·H₂0，接入YXY-C1種子液，通過固體發酵生產γ-多聚谷氨酸。

3.根據權利要求2所述生產γ-多聚谷氨酸的方法，其特征在于：

1)將權利要求1所述的菌種YXY-C?1接種到種子液培養基中，搖瓶發酵生產種子液，發酵條件為：pH生長范圍7.0-7.2，培養溫度30℃，攪拌速度為180-200轉/分鐘，發酵時間為16-20小時，發酵液中的菌體含量或芽孢量≥1×10⁹個/ml；所用種子液培養基的配制方法為，以配制1L培養基為例：稱取蛋白胨10克，酵母膏10克，氯化鈉10g，用水定容至1L，pH值調制7.0-7.2，121℃滅菌20分鐘；

2)配制固體發酵培養基20g，其方法為：牛糞2.94g，味精粕2.10g，豆粕1.92g，麩皮0.8g，玉米粉0.59g，檸檬酸0.16g，MgS0₄·7H₂00.04g，MnS0₄·H₂00.024g，用磷酸緩沖液調節pH至7.0，調節含水量為60％，121℃滅菌20分鐘；

3)將種子液以5％的接種量接種到固體發酵培養基中，充分攪拌均勻，置于恒溫箱中靜置培養，固體發酵溫度為37℃，恒溫箱中濕度保持在60％以上，每隔12小時攪拌發酵基質一次，發酵時間為48小時。

4.根據權利要求2或3所述生產γ-多聚谷氨酸的方法，其特征在于：

1)發酵基質中加入100ml去離子水，搖床振蕩混勻后4層紗布過濾取濾液，濾液離心去除菌體和雜質，上清即為含γ-多聚谷氨酸粗提物的產品。

2)向含γ-多聚谷氨酸粗提物的上清液產品中加入3倍體積預冷的無水乙醇，4℃靜置沉淀γ-多聚谷氨酸4小時，離心獲得沉淀，沉淀用等量去離子水溶解，離心將不溶的雜質沉淀，上清真空冷凍干燥，即可獲得純化的γ-多聚谷氨酸的固體產品。

5.權利要求2-4之一所述方法獲得的γ-多聚谷氨酸產品。

6.權利要求5所述γ-多聚谷氨酸產品的應用。

7.權利要求2-4之一所述方法獲得γ-多聚谷氨酸產品的的測定方法，包括：

1)將純化后的γ-多聚谷氨酸在真空條件下，110℃用6mol/L的HCl水解24小時；

2)水解液過濾，濾液經旋轉蒸發去除HCl后用Biochrom?30專用自動氨基酸分析系統測定其中游離谷氨酸的含量，即為YXY-C1菌株固體發酵生產γ-多聚谷氨酸的產量。