[發明專利]一種基于上轉換發光十通道免疫層析的食源性致病菌檢測試紙盤

有效

• 申請號: 201010257697.2
• 申請日: 2010-08-19
• 公開（公告）號: CN102375060A
• 公開（公告）日: 2012-03-14
• 發明（設計）人: 周蕾;王浩然;郭兆彪;楊瑞馥
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/532
• 代理公司: 北京太兆天元知識產權代理有限責任公司 11108
• 代理人: 張韜

發明領域

本發明涉及一種基于上轉換發光十通道免疫層析的食源性致病菌檢測試紙盤，其可經一次加樣即完成樣品中十種食源性致病菌的定性定量檢測。

背景技術

食品安全已成為全球重要的公共衛生問題，食源性疾病是食品安全的主要問題，世界衛生組織將食源性疾病定義為：“凡是通過攝食進入人體的，使人體患感染性或中毒性的疾病。”這里包括了由食品微生物污染和化學性物質引起的食源性疾病。而微生物引起的食源性疾病是食品安全的主要問題。世界衛生組織2002年3月公布，全球每年因食源性微生物污染引起的腹瀉病例達到數十億，死亡的0-15歲兒童約170萬。在發達國家至少有1/3的人患食源性疾病，在食源性疾病上花費達數十億美元。近年來，在國外食源性疾病事件頻頻發生，如英國的瘋牛病，日本的出血性大腸埃希氏菌O157:H7和雪印牛奶的葡萄球菌腸毒素中毒暴發，法國的李斯特氏菌中毒等。在我國盡管沙門氏菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌引起的食物中毒仍占主要位置，但近年來其它新的病原菌如出血性大腸埃希氏菌O157:H7、單核細胞增生李斯特氏菌等引起的食物中毒報道呈上升趨勢。1999年蘇皖等地引起的O157:H7大規模暴發流行，急性腎功能衰竭患者195人，死亡人數177人，病死率為90.8％。

快速高效的對水源、食品以及食品加工、販售環境中的食源性致病菌進行檢測與監測是降低食源性疾病的關鍵環節。食源性致病菌檢測與常規病原體檢測的突出區別在于食源性致病菌種類繁多，因而監測時無法針對性檢測只能大范圍篩查。如對人致病的沙門氏菌就包括甲型副傷寒沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌、丙型副傷寒沙門氏菌、傷寒沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌等十數種，此外還有霍亂弧菌、大腸桿菌、副溶血弧菌等等不一而足，而監測樣品與環境中可能含有其中的任何一種或任何幾種。傳統的單靶標檢測技術，無論是核酸檢測還是免疫檢測，均需對一份樣品重復多次操作，方可完成多靶標的一一檢測，這樣不僅增加監測的繁冗費時費力，且極易出現人工錯誤、延長檢測時間、現場可操作性差。若一次加樣即可實現多靶標的同步檢測，則可在最大程度上預防以及控制食源性疾病的發生。

十通道免疫層析試紙盤是基于免疫層析技術的高通量檢測方法，其利用試紙盤的獨特內部設計使得樣品在各通道內試紙之間的均勻分配以及后續的同步層析得以實現，由此將免疫層析的快速便捷與高通量得以融合(見附圖1)。然而，傳統免疫層析中所使用的膠體金、染料等顏色示蹤物則由于敏感性低、穩定性差、無法定量等缺陷限制了這一技術的發展。上轉換發光材料(Up-Converting?Phosphor，UCP)的出現彌補了這一不足。UCP顆粒是一種稀土金屬的雜合晶體顆粒，其由于獨特的化學組成以及物理結構，因而具有了自然界中獨一無二的上轉換發光現象，即其可由低能的紅外光激發發射高能的可見光。這一上轉換發光的特性使UCP顆粒作為免疫層析的示蹤物可抵抗樣品的熒光背景干擾，因而保證了檢測的敏感性、穩定性與特異性。此外，以光學信號取代顏色變化作為結果的指征，使得基于UCP顆粒的免疫層析可實現精確定量。若能將UCP顆粒與十通道免疫層析試紙盤相結合則可實現高通量的現場快速定量檢測。

發明技術

本發明目的在于公開一種基于上轉換發光十通道免疫層析的食源性致病菌檢測試紙盤，其可克服在先技術無法實現食源性致病菌的高通量現場檢測以及傳統免疫層析技術敏感性低、穩定性差、不可定量的問題，將UCP顆粒作為示蹤物與十通道免疫層析試紙盤相結合，最終實現了高通量的現場快速定量檢測。

本發明食源性致病菌檢測試紙盤的結構組成為：

試紙盤由上蓋[1]與底殼[2]構成(如附圖2所示)，底殼[2]中均勻放置有針對甲型副傷寒沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌、丙型副傷寒沙門氏菌、傷寒沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、單增李斯特菌、副溶血弧菌、大腸桿菌O157、霍亂弧菌O1群和霍亂弧菌O139群十種食源性致病菌的十種單靶標檢測試紙[3]，每種單靶標檢測試紙[3]針對一種食源性致病菌的特異性檢測；試紙盤內十種單靶標檢測試紙[3]上放置有引流片[4]，引流片[4]將上蓋[1]的加樣孔[5]與十種單靶標檢測試紙[3]的樣品墊[6]相互連通，保證液體樣品在十種單靶標檢測試紙[3]之間分配的均勻性；裝配完整的試紙盤中，加樣孔[5]對應于引流片[4]，結果掃描窗[7]對應于分析膜[8]，終點指示窗[9]對應于吸水墊[10]。

單靶標檢測試紙的結構組成為：樣品墊[6]、結合墊[11]、分析膜[8]、吸水墊[10]和粘性底襯[12]。