[發明專利]一種基于轉基因技術的阿爾茨海默病病理模型的建立方法

無效

• 申請號: 201010257218.7
• 申請日: 2010-08-19
• 公開（公告）號: CN101921796A
• 公開（公告）日: 2010-12-22
• 發明（設計）人: 高旭;惠洋;馬寧;周凌云;鄒朝霞;彭亞會;黃卉;王璐晶;呂桂香
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/53;A01K67/027
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種基于轉基因技術的阿爾茨海默病病理模型的建立方法。

背景技術

阿爾茨海默病(Alzheimer?disease，AD)是一種進行性發展的神經退行性疾病，病因未明，又稱為老年癡呆。隨著世界人口老齡化的加劇，AD患病率逐年上升，AD病人的治療費用驚人，給社會造成極大負擔。AD患者大腦皮質、海馬神經元存在大量的神經纖維纏結(neurofibrillary?tangles，NFT)是AD的重要組織病理標志之一。NFT是高度磷酸化的tau蛋白聚積形成的。到目前為止，AD的發病機制，以及AD的典型病理標志一一NFT現象發生的機制尚未得到闡明，給AD的預防和治療造成極大困難。

目前阿爾茨海默病動物模型多采用施加外傷和藥物誘導的方法，在實驗過程中難免會受到創傷、藥物等造成的多種干擾因素，導致結果難以分析。

發明內容

本發明主要是解決現有技術所存在的創傷、藥物等造成的多種干擾因素，導致結果難以分析等的技術問題；提供了采用轉基因技術建立的疾病模型具有遺傳背景清楚、遺傳物質改變簡單、更自然更接近疾病的真實癥狀的一種基于轉基因技術的阿爾茨海默病病理模型的建立方法。

本發明的上述技術問題主要是通過下述技術方案得以解決的：

一種基于轉基因技術的阿爾茨海默病病理模型的建立方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，構建一線性轉基因序列，該序列從5’至3’依次含有CMV增強子，Hchicken?β-actin啟動子，HO-1cDNA編碼序列，終止信號rabbitβ-globin?poly(A)sequence，

步驟2，應用顯微注射方法將構建的基因序列注入C57BL/6/DB(BDF1)小鼠受精卵；

步驟3，將步驟2中的受精卵植入假孕鼠的輸卵管；

步驟4，產生F0代轉基因小鼠，該小鼠基因組中整合有外源性HO-1表達序列；

步驟5，將獲得的陽性轉基因小鼠與正常小鼠雜交，獲得子代。

在上述的一種基于轉基因技術的阿爾茨海默病病理模型的建立方法，其特征在于，所述的HO-1為heme?oxygenase?1，血紅素加氧酶1。

因此，本發明具有如下優點：具有遺傳背景清楚、遺傳物質改變簡單、更自然更接近疾病的真實癥狀。

附圖說明

附圖1是線性轉基因序列，該序列從5’至3’依次含有增強子，啟動子，HO-1(heme?oxygenase?1，血紅素加氧酶1)內含子，HO-1cDNA編碼序列，終止序列；

附圖2是對轉基因小鼠和野生型小鼠的HO-1的mRNA水平進行比較，轉基因小鼠的HO-1表達水平明顯高于野生型小鼠；

附圖3是對轉基因小鼠和野生型小鼠的HO-1的蛋白水平進行比較，轉基因小鼠的HO-1表達水平明顯高于野生型小鼠；

附圖4是對轉基因小鼠和野生型小鼠腦的海馬和皮質組織進行tau蛋白的免疫組織化學染色，轉基因小鼠腦海馬和皮質組織中的tau蛋白表達水平明顯高于野生型小鼠；

附圖5是對轉基因小鼠和野生型小鼠腦的海馬和皮質組織中的tau蛋白進行western?bloting檢驗，轉基因小鼠腦海馬和皮質組織中的tau蛋白表達水平明顯高于野生型小鼠

附圖6是對轉基因小鼠和野生型小鼠腦的海馬和皮質組織中(199/202)位點發生磷酸化的tau蛋白進行western?bloting檢驗，轉基因小鼠腦海馬和皮質組織中的(199/202)位點發生磷酸化的tau蛋白表達水平明顯高于野生型小鼠。

具體實施方式

下面通過實施例，并結合附圖，對本發明的技術方案作進一步具體的說明。

實施例：

1.線性轉基因序列，該序列從5’至3’依次含有CMV增強子，chickenβ-actin啟動子，HO-1(heme?oxygenase?1，血紅素加氧酶1)cDNA編碼序列，終止信號rabbitβ-globin?poly(A)sequence，如圖1所示；

2.顯微注射方法將構建的基因序列注入小鼠受精卵；

3.將步驟2中的受精卵植入假孕鼠的輸卵管；

4.產生FO代轉基因小鼠，該小鼠基因組中整合有外源性HO-1表達序列；

5.對步驟4獲得的轉基因小鼠進行鑒定；

6.將獲得的陽性轉基因小鼠與正常小鼠雜交，獲得子代；

7.對轉基因小鼠和正常小鼠的HO-1的mRNA水平、蛋白水平以及酶活性進行比較；