[發明專利]抗人VEGF和OPN雙特異性抗體、其制備方法及用途

有效

• 申請號: 201010257132.4
• 申請日: 2010-08-19
• 公開（公告）號: CN102372778A
• 公開（公告）日: 2012-03-14
• 發明（設計）人: 戴建新;李博華;趙健;張大鵬;王皓;郭亞軍
• 申請（專利權）人: 上海抗體藥物國家工程研究中心有限公司
• 主分類號: C07K16/22
• 分類號: C07K16/22;C07K16/18;C12N15/11;C12N15/63;C12N5/10;C12P21/00;A61K39/395;A61P35/00
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技術領域

本發明屬于生物技術領域，更具體地，本發明公開了一類抗人VEGF和OPN雙特異性抗體、其制備方法及其在制備抗腫瘤藥物中的應用。

背景技術

惡性腫瘤是當今世界嚴重危害人類健康的疾病，在各種疾病所致死亡中高居第二位。而且近年來，其發病率呈明顯上升趨勢。惡性腫瘤治療效果差，晚期轉移率高，預后多不佳。目前臨床上所采用的常規治療方法如放、化療和手術治療雖然在很大程度上緩解了病痛，延長了生存時間，但這些方法均存在很大的局限性，其療效難以進一步提高。

血管生成對腫瘤的生長和轉移有著重要作用，使腫瘤的生長有兩個明顯不同的階段，即從無血管的緩慢生長階段轉變為有血管的快速增殖階段，促進腫瘤增殖、侵襲。新生血管的生長和成熟是一個復雜的多因子和多信號傳導過程的結果，其中涉及到很多血管生成因子，其中最主要的是血管內皮生長因子(VEGF)。VEGF能與細胞表面的血管內皮生長因子受體結合，通過激活酪氨酸激酶信號轉導途徑發揮功能，可以促進內皮細胞增殖、遷移，誘導血管形成，促進腫瘤持續生長，并提高血管通透性，引起周圍組織纖維蛋白沉著，促進單核細胞、成纖維細胞內、皮細胞侵潤，有利于腫瘤基質形成和腫瘤細胞進入新生血管，促進腫瘤轉移。大量結果證明，VEGF在促進腫瘤血管生成過程中起重要作用，阻斷VEGF被認為是當前最為有效的抗腫瘤治療方法之一。

腫瘤的發生發展是個多因素多機制多種因子參與的過程。有研究發現，在肝癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、結腸癌和肺癌等多種癌組織中均可發現骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)表達增加。進一步研究發現，人骨橋蛋白是一種含314個氨基酸殘基的磷酸化糖蛋白，含有凝血酶的的酶切位點，參與調節細胞骨架重構、細胞凋亡、細胞增殖和遷移等過程，且OPN受體和血管重建關系密切，整合素α_vβ₃和OPN的共同表達可以刺激內皮細胞遷移。OPN在腫瘤生長過程中新生血管形成的機制起到了重要的作用。因此，抑制OPN的活性可阻斷腫瘤血管生成，抑制腫瘤的生長。

大量研究表明，VEGF和OPN在血管生成的機制中有很大關聯.VEGF可誘導內皮細胞編碼α_vβ3的mRNA增加，使新生血管表面有α_vβ3高水平表達.而VEGF同樣也可以誘導編碼OPN的mRNA增加，而OPN是α_vβ3的配體，二者相互作用可促進內皮細胞遷移.VEGF可以迅速增加微血管的通透性，導致包括凝血因子在內的血漿蛋白濃度增高，上調一些蛋白分子的表達，如生長因子，粘附分子，蛋白酶，蛋白酶受體，易于激活外源性凝血途徑，產生凝血酶，促進OPN的酶切。體外實驗結果證實，經凝血酶酶切的OPN，其粘附力比未經酶切者強，能大大提高內皮細胞的遷移速度，促進微血管的生成。此外，OPN還能激活Brk/NF-nB/ATF-4信號轉導途徑來誘導VEGF的表達，并促進VEGF誘導內皮細胞增生的作用，進而促進新生血管形成，加快腫瘤細胞的生長及轉移。所以，如果能阻斷OPN，不但可以抑制其促腫瘤血管生成的作用，還可以下調VEGF的表達，進而阻止VEGF介導的腫瘤新生血管的形成。

由上可知，如果能同時阻斷VEGF和OPN，不但可以抑制VEGF的促血管生成的功能和OPN的促進腫瘤轉移的功能，還將降低內源性VEGF的表達，進而可進一步抑制VEGF的促血管生成作用，并減少其介導的OPN的酶切，從而抑制OPN的促進血管生成和腫瘤轉移的功能，故可能會比單獨阻斷VEGF或OPN有更好的抑制腫瘤生長轉移的協同作用，對腫瘤的治療將具有重要意義。