[發明專利]用反向遺傳操作拓展口蹄疫疫苗株抗原譜及疫苗制備方法

有效

• 申請號: 201010256781.2
• 申請日: 2010-08-18
• 公開（公告）號: CN101948811A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 劉在新;李平花;李冬;孫普;白興文;殷宏;盧曾軍;陳應理;謝寶霞;包慧芳;曹軼梅;曹偉軍;付元芳
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N15/42;C12N15/09;C07K14/09;A61K39/135;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及利用反向遺傳操作拓展口蹄疫疫苗株抗原譜及疫苗制備方法。

背景技術

口蹄疫(foot-and-mouth?disease，FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth?disease?virus，FMDV)引起的豬、牛、羊等多種偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。因其傳染性極強，世界動物衛生組織(FAO/OIE)將其列為必報疫病之首，我國規定為一類動物傳染病。該病的爆發和流行使家畜的生產力下降，活畜及畜產品貿易停滯，經濟損失巨大；同時，給公共衛生和國家聲譽造成嚴重的負面影響。因此，世界各國十分重視對該病的防控。目前，在世界上許多國家，尤其是非洲、亞洲和南美洲國家，該病發生次數頻繁，流行嚴重。此外，不時出現全球的流行性爆發。

預防和控制口蹄疫的一個主要措施是用疫苗免疫易感動物。常用的有效疫苗是滅活疫苗。其制備是用篩選的口蹄疫病毒接種培養的細胞，大量增殖病毒，收獲病毒，經滅活后與佐劑乳化而成。篩選的口蹄疫病毒即為疫苗株，也叫種毒。疫苗株必須滿足的一個要求是其抗原關系與流行的口蹄疫病毒(流行毒)密切。然而，口蹄疫病毒易發生變異，在不同畜種、不同地區流行的病毒，經反復感染，循環流行，會衍化出多個變異株(遺傳關系密切的毒株歸為一個譜系)，抗原有差異[B.Borrego，I.S.Novella，E.Giralt，D.Andreu，E.Domingo.1993.Distinct?repertoire?of?antigenic?variants?of?foot-and-mouth?disease?virus?in?the?presence?or?absence?of?immune?selection.J.Virol.67，6071-6079，A.Holguin，J.Hernandez，M.A.Martinez，M.G.Mateu，E.Domingo.1997.Differential?restrictions?on?antigenic?variation?among?antigenic?sites?of?foot-and-mouth?disease?virus?in?the?absence?of?antibody?selection.J?Gene?Virol.，78：601-609]。其結果使原有疫苗株的有效性減弱甚至喪失，難以達到免疫防疫要求，需要更換新的疫苗株，才能起到有效的免疫防控效果。

疫苗株有效性減弱的根本原因是抗原關系和流行毒疏遠，不匹配。和其它病毒一樣，不同病毒株間的抗原關系與組成病毒蛋白(結構蛋白)的氨基酸序列有關(口蹄疫病毒的結構蛋白有VP4，VP2，VP3，VP1四種，其中VP1暴露于病毒顆粒表面，且有一段氨基酸鏈形成環狀結構(G-H環)外露)。更為精確地說決定抗原關系的分子基礎是抗原決定族或抗原位點氨基酸序列組成的異同。當抗原決定族或抗原位點氨基酸序列發生變異，形成抗原性有差異的變異株，當發生多處變異或氨基酸累積變異，這種衍化的變異株與原病毒的抗原關系逐漸疏遠，原病毒作為疫苗株難以發揮有效的免疫預防作用，需要篩選新的疫苗株。但篩選新的疫苗株費時費力，甚至篩選不到滿足要求的種毒。更為困難的是，在一個地區或國家存在多個抗原差異的流行毒，篩選一個能匹配多個譜系流行毒的疫苗株幾乎不可能實現。

發明內容

本發明的一個目的是提供一株口蹄疫病毒毒株。

本發明所提供的口蹄疫病毒毒株，其VP3和VP1結構蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：4中第304-736位氨基酸殘基所示。

上述口蹄疫病毒毒株的結構蛋白如SEQ?ID?NO：4中第1-736位氨基酸殘基所示；

上述口蹄疫病毒毒株中，所述VP3和VP1結構蛋白的編碼基因如SEQ?ID?NO：2中第2569-3867位核苷酸所示；

上述口蹄疫病毒毒株中，結構蛋白的編碼基因如SEQ?ID?NO：2中第1660-3867位核苷酸所示。

上述口蹄疫病毒毒株的基因組RNA對應的cDNA序列如SEQ?ID?NO：2所示。

本發明的另一個目的是提供一種疫苗。

本發明所提供的疫苗，其活性成分為滅活的上述任一所述口蹄疫病毒毒株。

上述疫苗中，所述疫苗為口蹄疫疫苗；

上述疫苗中，使用的佐劑為IS201；佐劑IS201的產品名稱為Montanide?ISA?201VG，購自法國SEPPIC公司，產品目錄號為L01408。

上述疫苗中，所述口蹄疫為O型口蹄疫病毒引起的口蹄疫；

上述疫苗中，所述O型口蹄疫病毒為豬源的；