[發明專利]長期貯藏梨花粉種質的方法

有效

• 申請號: 201010256231.0
• 申請日: 2010-08-18
• 公開（公告）號: CN101982046A
• 公開（公告）日: 2011-03-02
• 發明（設計）人: 張紹鈴;陶書田;吳俊;齊永杰;齊開杰;吳華清
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: A01F25/00
• 分類號: A01F25/00;A01D91/04;A01H1/02
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

一、技術領域

本發明是長期貯藏梨花粉種質的方法，屬于植物發育生物學領域。

二、背景技術

梨(Pyrus)屬于配子體型自交不親和性果樹，絕大多數品種自花授粉不結實，在生產上必須配置授粉樹，或者進行人工授粉才能獲得預期的產量和品質。但在生產上由于花期不遇或者天氣原因，常常需要從外地采集、調用花粉，甚至需要用到前一年貯藏的花粉；在梨育種工作中，根據育種目標的不同，育種者也常常要從各地調用具特殊或優異性狀的梨種質花粉以豐富遺傳多樣性；此外，由于梨是典型的配子體型自交不親和性果樹，梨花粉在自交不親和性機理的研究中常常作為重要的研究試材，但梨花粉一年只能采一次，這必然涉及到在一年的研究周期中花粉的貯藏問題。不論從梨樹栽培、育種還是科學研究方面來說，其工作基礎是花粉須具有較高的活力，具有較高活力的花粉是上述工作取得成功的關鍵性前提條件。因此，怎樣在貯藏、運輸過程中延長花粉壽命，最大限度地維持花粉活力對梨樹生產、種質保存、科研具有重要意義。相關研究報道，花粉的活力受溫度和濕度的影響，但尚未形成能夠較好維持梨花粉活力的有效貯藏方法。一般常溫下貯藏的梨花粉活力迅速下降，失去應用價值。本發明通過比較研究不同貯藏方法對梨花粉萌發和花粉管生長的影響，形成包含三個關鍵技術步驟的梨花粉長期貯藏技術。該技術操作簡單易行，節省空間，有效維持了長期貯藏后梨花粉的活力，在梨樹生產、育種、種質保存、科學研究等方面具有重要的應用價值。

三、發明內容

技術要求

本發明的目的在于解決梨花粉在常規貯藏過程中花粉活力急速降低，以致不能滿足生產、科研需要的問題。

技術方案

本發明要解決上述問題所采用的新技術方案如下：

1、花粉采集方法：采含苞待放的大蕾期花苞，帶回室內，揉搓花朵，使花藥與花絲分離，用細孔篩篩下花藥。雨后采花或花瓣沾有露時，先晾干再揉搓花朵。花藥在溫度20～25℃、相對濕度70％～80％、無陽光直射的室內單層攤勻，經1～2天后即可散出花粉。爆出的花粉用石蠟紙分小包包好，每包5cm×5cm×0.5cm大小，埋入放有變色硅膠的干燥容器中，外用錫紙包扎整齊，以達到干燥遮光的目的；

2、液氮凍存花粉：根據所藏花粉量的多少來選擇大小合適的液氮罐，將包扎好的花粉置于液氮罐內，淹沒于液氮。為防止液氮揮發殆盡，貯藏期間內每隔兩個月補充一次液氮；

3、花粉復蘇：待需要使用花粉時，打開罐口，傾倒出罐內的液氮，此時切忌立即將包扎的花粉直接暴露于常溫環境中。因為升溫太快會導致花粉褐變，使得花粉蛋白酶性失活，大大降低花粉活力。應將貯藏的花粉依次在-73℃、-20℃、4℃中分別放置24小時進行逐步蘇醒，最后于黑暗環境中恢復至室溫，備用。

有益效果

本發明的貯藏方法有效地維持了經長期貯藏的梨花粉活力，對于梨樹的生產、育種、種質保存、科學研究等方面具有重要的有益效果，具體表現如下：

(1)保障了人工授粉時采集、調運花粉過程中花粉的安全性，使生產中保存花粉以備來年使用，保障花粉充足供應成為可能；

(2)為育種工作中所需的不同地域來源花粉的高活力保存提供技術支撐，同時為通過花粉進行梨種質保存提供了一條新的途徑；

(3)可以周年為梨自交不親和性機理科學研究提供具高活力的梨花粉，克服了相關研究的季節局限性；

(4)本貯藏方法投資小，操作簡單，能在很小的空間里貯藏大量的花粉，并可借鑒用于保存種子等其他種質資源，有著廣泛的實用價值。

四、附圖說明：

圖1‘豐水’梨花粉在-20℃、-73℃、-196℃三種貯藏環境下花粉活力的變化；

圖2長期貯藏梨花粉的流程示意圖；

五、具體實施方式：

(一)實驗方法

1、花粉采集：本專利以‘豐水’梨為研究試材，采集含苞待放的大蕾期花苞，收集花藥，室溫下干燥爆粉，待花粉散出后用石蠟紙包好，按不同的方法保存花粉，并定期進行檢測；

2、花粉保存方法：

(1)花粉貯藏溫度的梯度處理：將同一包花粉分成五份，每份約5cm×5cm×0.5cm大小，埋入放有變色硅膠(一種顆粒狀干燥劑，藍色，吸水后變白)的干燥容器中，分別在室溫、4℃、-20℃、-73℃、-196℃條件下貯藏。其中室溫下每隔5天，按上述花粉培養法測量一次花粉萌發率和花粉管長度。4℃每隔10天測量一次，而-20℃、-73℃、-196℃條件下貯藏的花粉將于貯藏之日起第30天、60天、90天、180天、270天、360天進行測定；