[發明專利]用于不同亞型非小細胞肺癌分型的一種核酸適體及其篩選方法有效
| 申請號： | 201010256095.5 | 申請日： | 2009-04-28 |
| 公開（公告）號： | CN101914542A | 公開（公告）日： | 2010-12-15 |
| 發明（設計）人： | 方曉紅;趙子龍;徐麗;上官棣華;譚蔚泓 | 申請（專利權）人： | 中國科學院化學研究所 |
| 主分類號： | C12N15/115 | 分類號： | C12N15/115;C12N15/10;C12Q1/68;C12Q1/02;G01N15/10;G01N21/64 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 不同 亞型非小 細胞 肺癌 一種 核酸 及其 篩選 方法 | ||
1.核酸適體，為序列表的序列9所示的DNA片段。
2.權利要求1所述核酸適體在不同亞型非小細胞肺癌細胞分型中的應用。
3.如權利要求2所述的應用，其特征在于：所述不同亞型的非小細胞肺癌細胞為腺癌亞型細胞、大細胞癌亞型細胞或鱗癌亞型細胞。
4.如權利要求3所述的應用，其特征在于：所述腺癌亞型細胞為A549細胞；所述大細胞癌亞型細胞為HLAMP細胞或NCI-H460細胞；所述鱗癌亞型細胞為NCI-H520細胞或NCI-H157細胞。
5.篩選權利要求1所述核酸適體的方法，包括如下步驟：用靶細胞對核酸文庫進行篩選，得到與靶細胞特異結合的核酸適體；所述核酸文庫為單鏈的隨機核苷酸序列的文庫；所述靶細胞為非小細胞肺癌細胞中的亞型細胞。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述篩選的方法包括如下步驟：
(1)以所述核酸文庫為起始核酸文庫；
(2)將所述起始核酸文庫的溶液與靶細胞孵育，靶細胞與起始核酸文庫中部分核酸分子結合，分離，得到與靶細胞結合的核酸文庫；
(3)將所述與靶細胞結合的核酸文庫的溶液與非靶細胞孵育，分離去除與所述非靶細胞結合的核酸分子，得到與靶細胞特異結合的核酸分子；
(4)得到核酸適體。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，還包括如下步驟：在得到與靶細胞結合的核酸文庫后，PCR擴增所述與靶細胞結合的核酸文庫，并制備成單鏈；所述步驟(3)中，還包括如下步驟：在得到與靶細胞特異結合的核酸分子后，PCR擴增與靶細胞特異結合的核酸分子，并制備成單鏈。
8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述篩選的方法中，在所述步驟(3)之后、步驟(4)之前，包括至少1次以下操作：以所述與靶細胞特異結合的核酸分子為起始核酸文庫，重復步驟(2)和(3)，每次操作均以前一次操作中得到的與靶細胞特異結合的核酸分子為起始核酸文庫。
9.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述靶細胞為腺癌亞型細胞；所述非靶細胞為大細胞癌亞型細胞。
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